Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Вахтин Ю.Б. -> "Методы культивирования клеток" -> 144

Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.

Вахтин Ю.Б., Соминина А.А. Методы культивирования клеток — Л.: Наука, 1988. — 313 c.
Скачать (прямая ссылка): metodikultivirovaniya1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 171 >> Следующая

в декстеровских культурах
Декстеровские культуры имеют чрезвычайно выразительную морфологию: в жидкой фазе плаваючт большие компактные «облака» кроветворных клеток, рыхло связанных с подложкой. Тесно расположенные созревающие кроветворные клеткн, лежащие на поверхности подслоя, образуют имеющие четкие: контуры территории, напоминающие булыжную мостовую.
Стромальная подложка абсолютно необходима для длительного гемопоэза; при ее отсутствии кроветворение быстро (за 1—3 нед) угасает [11, 12, 14, 15, 20]. Слои адгезивных клеток некостномозгового происхождения неспособны поддерживать длительный гемопоэз (см. [27]). Таким образом, костномюзговая подложка функционирует в декстеровских культурах как крсоветворное микроокружение.
Стромальная подложка, выстшиающая все дно культурального сосуда, является многослойной структурой, гетерогенной по своему составу [12, 13, 17, 18, 21, 23, 2J5]. Она образуется адгезивными клетками костного мозга, к которым относят стромальные механо-циты (фибробласты, ретикулярные клетки), макрофаги, клетки эндотелия и жировые клетки; какой именно из этих клеточных типов реально обеспечивает поддержание гемопоэза in vitro, окончательно не установлено [10, 11, 13, 14, 16„ 20, 21, 25, 26, 28]. В мышиных культурах подавляющее большинстгво морфологически гетерогенных клеток подложки обладает важнейшими маркерными признаками фибробластов и лишено маркерным признаков макрофагов и эндотелия (синтезирует коллаген I и НИ типов и фибронектив, не несет рецепторов к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, не окрашивается на коллагены IV и V типов и ламини!н) [28]. Входящие в состав подложки жировые клетки, которым ряд авторов отводят первостепенную роль в поддержании гемопоэза [12—14, 19, 21, 26], также, по-видимому, являются видоизмененными фибробластами (см. [27]). В адгезивном слое декстеровскиж культур присутствуют клетки, обладающие остеогенными свойствами [29]. Все эти факты позволяют предположить, что основным клеточным типом, поддерживающим гемопоэз в декстеровских культурах, являются костномозговые фибробласты. Окончательно прояснить этот вопрос позволило бы использование в качестве подложки декстеровских культур чистых (предпочтительно клонированных) штаммов диплоидных стромаль-
ных клеток строго определенных тнпов: остеогенных и неостеогеиных фибробластов и эндотелия. По предварительным данным клонированные штаммы костномозговых фибробластов человека длительно поддерживают гемопоэз in vitro [30].
Кроветворение в декстеровских культурах протекает как в суспензии, так и в адгезивном слое, который является главным местом образования СКК [11]- Количество плавающих клеток в культурах костного мозга мыши поддерживается на уровне 10—60 %, СКК — 10—50%, КОЕ-К— 15—25% от первоначального [14, 28]. СКК декстеровских культур функционально нормальны и сохраняют высокие дифференцировочные потенции: защищают летально облученных мышей, образуют при трансплантации все типы селезеночных колоний [8, 11, 14, 18], продуцируют нормальные В-лимфоциты и различные субпопуляции Т-лнмфоцитов. Непосредственно в декстеровских культурах СКК в течение многих недель образуют весь спектр коммитироваиных предшественников гемо- и лимфопоэза (см. [27]). Однако не все типы предшественников созревают. Уже после 1-й недели в мышиных культурах не остается ни морфологически различимых эритроидных клеток, ни лимфоцитов [8, 12, 17, 18]; гемопоэтиче-ская дифференцировка приводит к образованию нейтрофильных гра-нулоцитов, макрофагов и мегакариоцитов [11, 12, 17, 18].
Особенностью культур костного мозга человека является длительный лимфопоэз и морфологически различимый эритропоэз, идущий до 3 нед в отсутствие экзогенного эритропоэтина [17, 23, 25].
Регуляция пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток осуществляется в декстеровских культурах как путем локальных взаимодействий с клетками адгезивной подложки [11, 12, 21], так и посредством синтезируемых стромальными клетками гуморальных факторов: белков, регулирующих пролиферацию СКК (NBME-1V и RBME-III), мукополисахаридов, возможно— колониестимулирующего фактора (см. [27]).
Фактически декстеровскне культуры — едва ли не первая многокомпонентная тканевая система in vitro, в которой длительно осуществляются морфогенетические межклеточные взаимодействия, обеспечивающие полную клеточную дифференцировку и поддержание популяции пролиферирующих клеток в равновесном состоянии. Поскольку иммунекомпетентные клетки исчезают из человеческих культур раньше, чем затухает кроветворение, кажется вполне реальным, что клетки из поздних культур могут восстанавливать гемопоэз у облученных людей, не вызывая реакции «трансплантат против хозяина». В длительных декстеровских культурах возможно отделить лейкозные стволовые клетки от нормальных СКК и затем произвести аутотрансплантацию последних облученному больному [9]. Взаимодействие со стромальным подслоем декстеровских культур человека вызывает дифференцировку некоторых лейкозных клеточных линий (см. [27]).
Описаиа злокачественная трансформация декстеровских культур, как спонтанная, так и иидуцированиая введением лейкемогенов и вирусов, что делает систему перспективной для вирусологических
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed