Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Целесообразно заморозить достаточно большое количество некон-таминированных клеток и культивировать их после размораживания только в течение времени, необходимого для эксперимента. Клетки китайского хомячка линии DUX11 чувствительны к версену, поэтому их рассевают, обрабатывая 0.25 %-ным раствором трипсина (на PBS); клетки остальных указанных в таблице линий можно рассе-вать, используя смесь 0.25 %-ного раствора трипсина и 0.2 %-ного раствора (на PBS) версена (в отношении 1:1). ТК~-клетки линий А238 и LMtk~ следует периодически культивировать на ростовой среде, содержащей 50 мкг/мл БДУ; клетки линий HeLa и Vero до трансформации геном Ч^ГФРТ мы культивируем на среде ГАТ. К ростовой среде мы обычно добавляем неосновные аминокислоты (НОА).1
' Здесь, если это специально не оговаривается, любая ростовая среда содержит НОА.
14 Заказ 1789
Частота трансформации клеток разных линий клонированными генами
Клетки-реципиенты Ростовая среда Генетический маркер Селективный ген Селективная среда * ДНК- Частота
(с 10 % СЭК) клеток носи- трансформации
тель **
Человек: линия а-Модификация Отсутствует КГФРТ (под конт МКГАТ + 9.9 • 10"4
HeLa-p среды Игла --- ролем промотора 1.0 • 10“4
а-МЕМ ранних генов
ОВ40)
Зеленая мар Среда Игла в моди » То же + 1.2 • 10-4
тышка: линия фикации Даль- 1.3 • 10-5
Vero *** бекко --- ДМЕМ
Китайский хомячок:
линия А238 Среда Хэма F-10 Отсутствие актив- ТК ВПП ГАТ 4- 6.8 • 10“5
Н0СТИ TK 0.9 • Ш-5
линия DUX 11 То Же Отсутствие актив ДГФР (кДНК гена Среда без нук + 3.0 • 10_3
ности ДГФР ДГФР мыши под леотидов с 10 % з.з • ю-4
контролем промо диализованной
тора поздних генов СЭК
аденовируса)
Мышь:
линия LMtk' ДМЕМ Отсутствие актив ТК ВПП ГАТ + 9.9 - 10~5
ности тк 1.1 • ю-5
линия LMtk~ То же АГФТ (под контро Антибиотик G-418 + ОО *---
лем промотора (генетицин) ОО О
ранних генов о о
ОВ40) 1 1
СП W
линия С 127 **** Неспособность клЫ~Ьк 0.69T ВПКРС-1 Отбор фокусов + 1.0 • ю-4
к многослойному роста 1.0 • 10“5
росту
Примечание. * — пропнсн селективных сред см. ниже; i::i: клетки трансформировали кальцнйфоефатным преципитатом ДНК
в отсутствие или в присутствии ДНК-носнтеля из спермы лосося; • • аналогичные результаты получены с клетками зеленой мартышки линии CV-1; **** — аналогичные результаты получены с клетками мыши линии N1H3T3. При обработке клеток линий HeLa-p, Vero, CV-I, DUX 11, LMtk-и CI27 кальцнйфоефатным преципитатом ДНК-носителя в отсутствие векторных ДНК с селективными генами и селекции клеток на указанных g средах мы не получили колоний клеток. Частота спонтанных н индуцированных преципитатом ДНК-носнтеля реверсий клеток клона А238
