Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 10-4. Влияние окислительного дсзазниин- .та, который спаривается с адсшншм я ш
роиания оснований ДНК на спаривание о (.но- с гуагатном В Гуанин дсзазшнир.чется до
ианин (Hayes, The Genetics of Bacteria and ксантина, который все /«с сиарииается о цп"-
TKcir Viruses, Blackwell, Oxford, 280, 19K4). энном, но при атом всего лишь двумя исшрод
А. Адсшш дезаминируется до гппоксаитина, ными синаями. Гимин (ДНК) и ураимм (РЩ
которым сиаринается имеете тмина с цито- но содержат амипогрунпы и поэтому не из
айном В. Цитозин дезаминируется до ураци- меняются под воздействием азотистой кислота
КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ КАПОЙ И СООТВЕТСТВУЮЩИМ УЧАСТКОМ МОЛЕКУЛЫ ДНК
С тех пор как началось изучение кроссннговера, генетиков не переставал интересовать вопрос о том, насколько точно соответствуют их генетические карты действительно существующим физическим участкам в хро-
q\ Дезоксирибоза
5-бромурацил (нормальная кетоформа)
Дезоксирибоза N j- 5-брому рацн л
(редкая енольная форма)
Рис 10-5. Спаривание основании с 5-брому- во го азота кольца) бромурацмл спаривается рацн кш (Hayes, The Genetics of Bacteria and с адснииом Б. Таутомерное превращение
Tleir Viruses, Blackwell, Oxford, 278, 1964) в снольную форму (происходит редко) нрнво-А fc нормальной кстоформе (водород у пер- дит ь специфическому спаривав ню с гуанином.
мосоме. В 30-х годах были проведены визуальные исследования очень крупных по своим размерам хромосом слюнных желез дрозофилы, что позволило точно картировать сайты мутаций Было показано, что между физическими и генетическими расстояниями вдоль некоторых участков хромосом наблюдается хорошая корреляция. Однако такое изучение хромосом с помощью светового микроскопа не даст пикаких сведении
о структуре молекул ДНК, входящих в состав jthx хромосом Четкий ответ на этот вопрос на молекулярном уровне был па1учен только тогда, ко1 да стала возможной локализация сайтов специфических мутации на хорошо изученной вирусной хромосоме (молекуле ДНК)
Б настоящее время наиболее изученной хромосомой является хромосома фага Я. Для определения физической локализации различных мутаций применяют несколько методов В одной из этих методов используется возможность разрывать двухцрпочечные молекулы ДНК при перемешивании их в гомогенизаторе на фрагменты различной длины. При определенной скорости перемешивания молекулы ДНК фага % разрываются пополам, при более высокой скорости — иа четыре части и т д Фрагменты, различающиеся но плотности, можно затем рачделить с помощью равновесного центрифугирования в градиенте GsCL Поскольку фрагменты, богатые ГЦ-парами, имеют более высокую тотпость по сравнению с фрагментами, богатыми АТ-парамм, равделепие разтичиых фрагментов можно легко осуществить, если онп отличаются друг от друт разным
Рис. 40-6, Картирование дслеции в ренату рированных молекулах ДИК с помощью электронною микроскопа.
А. Нормальная молекула ДНК фага 'К дикого типа В Двухцепочечнан молекула ДНК мутантною фага К, содержащая делоцию участка а В. Нагрсгтние почтя до 100°С. 1. Цени разделены с помощью iрадменхного центрифугирования в растворе CsCl благодаря тому, что они различаются по ллохности. Д. Нормальная (+)-цопь и (—)-цепь с делецш нагреты почти до 100°С, а затем медлен# охлаждены. Е. При ренахурации образуется сметанная двухцепочечиая молекула с петлей из неспарендых оскоиашш в области делецяп.
отношением ЛТ/ГЦ. Именно это и имеет место в молекуле ДНК фага Я, у которой левая сторона значительно богаче ГЦ- парами, чем правая (рис. 15-9). Очищенные левые и правые половины молекул ДНК можно затем использовать в экспериментах по трансформации ДНК, чтобы выяснить, какие юпы находятся в каждом из этих фрагментов. Полу-чепньте результаты показывают, что между правыми и левыми половинами молекул ДНК и соответствующими частями генетической карты наблюдается хорошая корреляция.
Значительно более точные данные были получены при картировании хорошо изученных делеций большого числа нуклеотидов. Такое картирование можно осуществить, используя метод гибридизации ДНК с ДНК. Две цени ДНК фага % отделяют друг от др5га путем нагревания раствора ДНК почти до 100 °С. При этой температуре практически все водородные связи, удерживающие вместе обе цепи в молекуле ДНК, разрываются, а образовавшиеся свободные одиночные цепи раскручиваются и отходят друг от друга (денатурация ДИК). Цели ( + ) и ( —) молено затем разделить благодаря их различной плотности с помощью центрифугирования в растворе CsCl. Повторное образование двойных спиралей из разделенных одиночных цепей (ренатурация) происходит в том случае, ести растворы, содержащие одиночные цепи и нагретые приблизительно до 100 °С. смешиваются, а затем медленно охлаждаются. Б этих условиях первоначальные водородные связи между комплементарными цепями восстанавливаются, в результате чего образуются молекулы, которые при
