Методы практической биохимии - Уильямс Б.
Скачать (прямая ссылка):
200 Часть III. Аналитические методы
Рис. 6.7. Иллюстрация принципа счета образца с двойной меткой.
Определение эффективности счета. Как было отмечено выше, основным недостатком сцинтилляционных счетчиков является тушение флуоресценции. В связи с этим возникает необходимость определять эффективность счета, если не во всех, то в отдельных опытах. Это делается одним из методов стандартизации.
Внутренняя стандартизация. В этом случае образец просчитывают (число импульсов в 1 мин равно А), извлекают из счетчика, добавляют в него вещество с известной активностью (В распадов в
1 мин) и снова просчитывают (С импульсов в 1 мин). Эффективность счета образца вычисляется по формуле
-~А'~ 100. в
При таком способе определения эффективности надо быть уверенным, что добавляемый стандарт содержит тот же самый изотоп, что и образец, и сам не является тушителем. Для 14С в качестве стандартов применяются 14С-толуол, гексадекан и 14С-бензойная кислота. Для 3Н имеются следующие стандарты: 3Н-толуол, 3Н-гек-садекан и 3Н-вода (бензойная кислота и вода взаимно тушат друг друга и их следует брать в очень малых количествах).
Внутренняя стандартизация является простым и надежным способом и дает правильную поправку для всех видов тушения. Но, с другой стороны, этот метод требует внесения очень точного количества стандарта, а кроме того, на такую проверку уходит много времени — каждый образец просчитывается дважды. Следует иметь в виду также, что образец после добавления стандарта не может быть пересчитан, поэтому в случае ошибки весь опыт нужно ставить заново.
Гл. 6. Радиоиаотопные методы 201
Рис. 6.8. Калибровочная кривая цля определения эффективности счета при помощи внешней стандартизации.
Внешняя стандартизация.
Для определения эффективности счета этим методом необходимо иметь калибровочную кривую. Для этого сначала просчитывают контрольный препарат, содержащий только сцинтилляционный раствор (S имп-мин-1), в присутствии у -активного внешнего стандарта, который помещают за контрольным препаратом. Затем контрольный препарат вынимают из счетчика и добавляют небольшое количество тушителя—анилина, ацетона или судана III. После такой операции еще раз просчитывают контрольный препарат (Т имп-мин-1) и вычисляют отношение т
-g-X 100. Затем в раствор вновь добавляют тушитель и снова считают импульсы. Эту операцию повторяют несколько раз, получая т
ряд значений X100, от нулевого тушения до сильного. Затем приготавливают второй препарат, содержащий известное количество радиоактивного стандарта (X расп.-мин-1), просчитывают его
у
(Y имп-мин-1) и вычисляют эффективность счета -^-Х100. Далее
повторяют все те же процедуры, что и с контрольным препаратом, т. е. многократно добавляют тушитель и каждый раз определяют
Т у
эффективность счета. Из двух серий данных ^-Х100 и^-Х100
строят калибровочную кривую, как это показано на рис. 6.8.
При определении радиоактивности экспериментальных образцов сначала определяют число импульсов в отсутствие внешнего стандарта (D имп-мин-1), а затем в его присутствии (Е имп-мин-1), после чего просчитывают контрольный образец, не содержащий радиоактивности, в присутствии внешнего стандарта (F имп-мин-1). Затем вычисляют процентное содержание внешнего стандарта в каж-
?__D
дом экспериментальном образце —у— X100 и далее по калибровочной кривой определяют эффективность счета.
В большинстве сцинтилляционных счетчиков операции сравнения с внешним стандартом производятся автоматически, поэтому такая методика определения эффективности имеет преимущество перед внутренней стандартизацией. Кроме того, здесь не привносится никаких ошибок из-за неточного отбора стандартных образ-
Эффективность счета данного изотопа (например, ,4С>
202 Часть . III. Аналитические методы
цов. Состав каждого образца не меняется, и одна калибровочная кривая годится для всех типов тушения. Нужно помнить, однако, что каждая калибровочная кривая пригодна для счета одного типа изотопов в данном сцинтилляторе и для данного счетчика — для разных изотопов и различных сцинтилляторов калибровочные кривые разные. Хотя метод внешней стандартизации и имеет свои преимущества, он является наименее точным при определении эффективности счета, особенно если образцы сильно окрашены.
Метод отношения каналов. Тушение, как это видно из рис. 6.9, уменьшает средний энергетический уровень спектра р-частиц. Это уменьшение тем больше, чем сильнее тушение. Этот факт позволяет определять эффективность счета сравнением каналов. Подобно внешней стандартизации, этот метод требует построения калибровочной кривой. Удобнее работать с двухканальным счетчиком, но эти же данные можно получить и на одноканальном счетчике, только образцы приходится просчитывать дважды в разных каналах. Один канал охватывает весь исходный спектр р -частиц, а второй — от трети до половины спектра (соответственно каналы 1 и 2 на рис. 6.9). Образец, содержащий известное количество стандарта (Р расп,.-мин-1), просчитывают в каждом канале (Q имп-мин-1 в канале 1 и Н имп-мин-1 в канале 2). Вычисляют эффективность счета в канале 1, равную (Q/P) X100, и отношение счетов в каналах
