Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уильямс Б. -> "Методы практической биохимии" -> 38

Методы практической биохимии - Уильямс Б.

Уильямс Б., Уилсон К. Методы практической биохимии — М.: Мир, 1978. — 273 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiprakticheskoybiohimii1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 112 >> Следующая

G-200 1000- 200000* 20,0 30---40
5000---600 000**
* Для полисахаридов с произвольной пространственной структурой. ** Для пептидов н глобулярных белков.
Гели сефадекса нерастворимы и стабильны в воде, солевых растворах и органических растворителях-, а также в щелочных и слабокислых растворах. В сильнокислых растворах может произойти гидролиз гликозидныхсвязей матрицы геля. Однако при выдерживании сефадекса в 0,1 М растворе НС1 в течение 1—2 ч его свойства не изменяются, а в растворе 0,02 М НС1 сефадекс остается без изменений в течение 6 мес. Следует, однако, избегать длительного контакта геля с окисляющими агентами, поскольку это может привести к изменению его свойств. Во влажном состоянии сефадекс можно стерилизовать в автоклаве при температуре 100°С в течение 40 мин; свойства геля при этом не меняются.
Гл. 3. Хроматографические методы 95
Агарозные гели, приготавливаемые из агара,— это линейные полисахариды, состоящие из чередующихся остатков D-галак-тозы и «.б-ангидро-Ь-галактозы. Свойства гелей им придают водородные меж- и внутримолекулярные связи. Благодаря своей гидрофильной природе и почти полному отсутствию заряженных групп агарозные гели, подобно декстрановым, лишь в незначительной степени вызывают денатурацию и адсорбцию лабильных биохимических соединений.
Агарозные гели, отличающиеся высокой степенью пористости, хорошо дополняют декстрановые. В отличие от последних, которые применяются для фракционирования сферических молекул, таких, как глобулярные белки мол. весом примерно 800 ООО или произвольно свернутые полимеры (например, декстран с мол. весом до 200 ООО), агарозные гели применяются для разделения молекул и частиц с молекулярным весом порядка нескольких миллионов даяьтон. В связи с этим они широко используются при изучении вирусов, нуклеиновых кислот и полисахаридов.
Агарозные гели можно комбинировать с любыми водными буферами; они не разрушаются в растворах с высокой концентрацией солей, например в 7 М мочевине, устойчивы в 95%-ном спирте и при pH от 4 до 10, а иногда и до 13. Диапазон рабочих температур — О—30°С-; при более высоких температурах гель размягчается, а замораживание вызывает необратимые нарушения его структуры.
Агарозные гели обычно представляют собой густые суспензии в дистиллированной воде, содержащей какое-либо бактериостатиче-ское вещество, например азид натрия в концентрации 0,02%.
Таблица 3.8
Свойства некоторых сефарозных гелей
Тип Приблнз нтельная Приблизительная область разделения
концентрация агаро (мол. вес. дальтоны)
полисахариды белки
Сефароза 2В . . . 2 20-106 40-10е
Сефароза 4В . . . 4 510е 20-106
Сефароза 6В . . . 6 МО6 4-10®
Полиакриламидные гели получают путем полимеризации.акрил-амида и метиленбисакриламида. Изменяя соотношение между этими двумя мономерами, удается получать гели с различной степенью пористости. По своим свойствам они очень близки к декстрановым и агарозным гелям — стабильны в водных буферах в интервале
96 Часть II. Методы разделения
значений pH от 1 до 10, практически нейтральны и обладают одинаковой способностью связывать воду. Они имеют предел молекулярной эксклюзии в диапазоне молекулярных весов 1800-Т-400 ООО дальтон. /
Вместо гелей в ряде случаев применяются пористые стеклянные шарики из боросиликатного стекла, пронизанные множеством соединяющихся между собой пор заданного диаметра; эти шарики имеют предел молекулярной эксклюзии от 3000 до 9000 000 дальтон и выполняют роль частиц обычного геля, однако обладают по сравнению с ними рядом преимуществ, а именно:
а) химически инертны ко всем реагентам, за исключением фтористого водорода и сильных оснований;
б) обладают исключительно четкими пределами эксклюзии и поэтому характеризуются большей разрешающей способностью и обеспечивают лучшее разделение;
в) дают возможность значительно сократить время подготовки колонки, поскольку не нужно тратить время на их набухание;
г) шарики не слипаются между собой, поэтому растворитель можно пропускать с большой скоростью;
д) размер пор стеклянных шариков не зависит от растворителя и pH, поэтому можно использовать любые растворители и растворители любой ионной силы, что дает возможность применять их при градиентной элюции;
е) стеклянные шарики легко промывать и стерилизовать.
3.7.3. Гель-фильтрация; теоретические основы
Способность молекул анализируемого соединения проникать в растворитель, поглощенный частицами набухшего геля, зависит от степени пористости частиц геля и от размера молекул соединения. Распределение вещества на колонке, заполненной набухшим гелем, зависит от общего объема растворителя внутри и снаружи частиц геля.
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 112 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed