Методы практической биохимии - Уильямс Б.
Скачать (прямая ссылка):
3.6.3. Ионообменная хроматография на бумаге
Для разделения различных соединений с успехом применяется хроматография на ионообменной бумаге. Эту бумагу легко получить, химически модифицировав целлюлозу. Существуют следующие виды ионообменной бумаги: ДЭАЭ-целлюлозная (сильноосновная) И КМ-целлюлозная (слабокислая), а также фосфатно-целлюлозная (сильнокислая), цитратно-целлюлозная (слабокислая) и аминоэтил-целлюлозная» (слабоосновная). В ряде случаев бумагу пропитывают ионообменной смолой (45% на вес смолы); такая бумага имеется в продаже, например амберлит SA-2 (сильнокислая) и амберлит SB-2 (сильноосновная).
Некоторые ионообменные материалы (например, производные целлюлозы и сефадексы) применяются также и в тонкослойной хроматографии (разд. 3.7.6).
3.7. Проникающая хроматография
3.7.1. Принцип метода
Разделение молекул по размерам и форме основано на свойствах молекулярного сита, которыми обладают многие пористые материалы. Наиболее часто для этой цели применяют органические полимеры с трехмерной сетчатой структурой, придающей им свойства гелей. Разделение веществ при помощи гелей, основанное на различиях в размере молекул, называется гель-фильтрацией. В последнее время в качестве молекулярного сита стали применять пористые стеклянные гранулы, а сам метод разделения получил название
Гл. 3. Хроматографические методы 93
хроматографии фильтрованием через стекло с заданным размером пор. Понятие проникающая хроматография включает в себя все виды разделения молекул, основанные на принципе молекулярного сита. В данном разделе речь пойдет в основном о гель-фильтрации, так как 'ьам метод и его практическое применение описаны наиболее полно; однако следует иметь в виду, что вышеупомянутый метод хроматографии фильтрованием через стекло с заданным размером пор имеет с гель-фильтрацией много общего.
*.Ы1Л
ООО
ООО
ОООО
ОООО
оООО
оООО
°ооо
о Матриц?
• Крупные молекулы •Мелкие махекуяы
Рис. 3.12. Разделение веществ методом проникающей хроматографии.
Принцип, лежащий в основе метода проникающей хроматографии, весьма прост. Хроматографическую колонку заполняют набухшим гелем или пористыми стеклянными шариками и уравновешивают с помощью соответствующего растворителя. Крупные молекулы, не проникающие в поры сита, проходят между частицами геля, в то время как небольшие молекулы «застревают» в них и движутся’с меньшей скоростью. Три стадии такого разделения схематически изображены на рис. 3.12.
3.7.2. Материалы для проникающей хроматографии
К материалам для проникающей хроматографии относятся гели, в том числе и декстраны с поперечными сшивками (торговое название сефадекс), агарозные гели (сефароза, биогель А, сагавак), полиакриламидный гель (биогель Р), полиакрилоилморфин (энзокрил-гель) и полистиролы (Био-Бидз S). Применяются также пористые стеклянные шарики (гранулы), известные под названием биоглас, и пористый кварц — порасил.
Декстрановые гели получают поперечным сшиванием полисахаридных цепочек декстрана эпихл’оргидрином, благодаря чему растворимый в воде декстран становится водонерастворимым, сохраняя при этом свои гидрофильные свойства и способность к быстрому на-
94 Часть II. Методы разделения
буханию в водной среде. Варьируя число поперечных сгйивок, удалось получить несколько различных типов сефадексов, различающихся степенью пористости частиц, что позволяет примерять их для разделения веществ с различными размерами молекул. Поскольку поперечные связи между цепочками распределены произвольно, размеры пор одного и того же геля варьируют в весьма широких пределах. Это означает, что молекулы, размер которых меньше некоторого критического, могут полностью или частично проникать внутрь частиц геля. Каждый тип сефадекса характеризуется так называемой «величиной поглощения воды», т. е. количеством воды, приходящейся на 1 г сухого сефадекса в полностью набухшем геле. (табл. 3.7)
Таблица 3.7
Типы сефадексов
Тнп геля Область разделения Поглощение воды, Объем набухшего геля,
по молекулярному весу, г/г сухого геля см3/г сухого геля
дальтоны
G-10 ДО 700* 1,0 2
G-15 до 1500* 1,5 3
G-25 100---5000* 2,5 5
1000---5000**
G-50 500---10 000* 5,0 10
1500---30 000**
G-75 1000---50 000* 7,5 12---15
3000---80 000**
G-100 1000---100 000* 10,0 15---20
4000---150000**
G-150 1000---150 000* 15,0 20---30'
5000---300 000**
