Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уильямс Б. -> "Методы практической биохимии" -> 31

Методы практической биохимии - Уильямс Б.

Уильямс Б., Уилсон К. Методы практической биохимии — М.: Мир, 1978. — 273 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiprakticheskoybiohimii1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 112 >> Следующая

3.4. Противоточное распределение
3.4.1. Принцип метода
Этот метод разделения основан на распределении соединений между двумя несмешивающимися жидкими фазами. Он отличается от обычной распределительной хроматографии тем, что ни одна из фаз не фиксируется на сорбенте или бумаге, однако в основе его лежит тот же принцип, что и в традиционной распределительной хроматографии, а именно различие в коэффициентах распределения соединений между двумя несмешивающимися фазами. В качестве фаз для противоточного разделения применяют смеси растворителей, буферов, солей и различные комплексообразующие реагенты.
Две несмешивающиеся жидкости помещают в пробирку, а затем вносят пробу, которая распределяется между ними. Затем верхнюю фазу переносят в другую пробирку, содержащую такой же объем свежей нижней фазы; в этой пробирке также происходит перераспределение перенесенной части пробы. В первую пробирку с нижней фазой добавляют новую порцию верхней фазы, и здесь опять происходит перераспределение пробы. Таким образом, верхняя и нижняя фазы последовательно смешиваются несколько раз; после каждого такого перемешивания происходит перераспределение веществ.
В лабораторной практике для проведения такого разделения пользуются специальным прибором для противоточного распределения веществ, состоящим из большого количества соединенных между собой ячеек. Число переносов проб варьирует в весьма широких пределах (от 30 до 1000); благодаря особой конструкции ячеек перенос верхней фазы из одной ячейки в другую осуществляется за счет простого вращения прибора.
Как уже говорилось в разд. 3.1, коэффициент распределения вещества выражается следующим отношением:
Концентрация растворенного вещества в верхней фазе
» ----------------------------------------------- ¦
Концентрация растворенного вещества в нижней фазе
78 Часть II. Методы разделения
И
III
IV
исш-
[Щ] сиси ос
0 12 3
2 О
I || || 110,2511 0,251 ~
Щ25\\Щ\\ ||
0 12 3
2 1 О
I II | \ 0,125) \о,25\\Р,125\---------------»
\0,125\ | 0,25\\0,12S\ | |Г
а-
6
а
6
а
6
О
3
3
о
4
I \о,об2\ \пт\\о,1в7\\ат\—* а
\0,062\ Iа,187\\0,187\\0,062\ | | 6
0 12 3 4
4 3 2 1 О
\0,031\\0,125\\0,187\ \0,125\ \o,Q3l\ а
\ojQ3i\ \o,t2511о,т\ \о,т\\о.оз11 6 0 12 3 4
Рис. 3.5. Схема разделения веществ с помощью протнвоточного распределения.
Если коэффициент равен единице, то 50% Еещества будет находиться в верхней фазе, а 50% — в нижней, при условии что объемы обеих фаз равны.
На рис. 3.5 наглядно изображено, кгк происходит противоточ-ное распределение веществ. Прямоугольники а и б — это пробирки с верхней и нижней фазами соответственно. Пусть коэффициент распределения исследуемого вещества равен единице; тогда в ряду! после распределения вещества между равными объемами двух растворителей содержание его в обеих фазах будет равно 0,5. Если теперь перемешать верхнюю фазу, содержащуюся в пробирке 0а, со свежей нижней фазой в пробирке 1 б, а нижнюю фазу Об со свежей верхней фазой 1 а, растворенное вещество распределится так, как это показано в ряду II. При последующем перемешивании содержимого пробирок 0а и 26, 1а и 16, Об и 2а вещество распределится так, как это показано в ряду III. В ходе протнвоточного распределения этот процесс повторяется много раз. Если после восьми таких перемещений пробирок провести количественный анализ содержания растворенного вещества в каждой из них (т. е. оценку общего содержания вещества в верхней и нижней фазах), то мы получим распределение, изображенное на рис. 3.6: растворенное вещество находится во всех пробирках, однако в пробирке 4 концен-
Гл. 3. Хроматографические методы 79
Номер пробирки
Рис. 3.6. Распределение растворенных веществ с различными коэффициентами распределения.
/— коэффициент распределения 0,3; // — коэффициент распределения 1,0; III — коэффициент распределения 3,0.
трация его максимальна. Если коэффициент распределения вещества больше или меньше 1 и равен, например, 0,3 или 3, то распределение будет выглядеть иначе (рис. 3.6).
3.4.2. Аппаратура
На рис. 3.7 показана ячейка для разделения веществ методом противоточного распределения. В каждую ячейку вносят нижнюю фазу двух несмешивающихся растворителей; затем в первую ячейку добавляют верхнюю фазу вместе с подлежащей разделению смесью.
Растворенное вещество уравновешивают с обеими фазами путем перемещения ячейки из положения А в положение Б. В положении Б обе фазы разделяются, после чего ячейку переводят в положение В. В этом положении верхняя фаза переходит по трубке в в трубку г, а нижняя остается. По возвращении ячейки в положение А верхняя фаза, находящаяся в трубке г, из-за особой конструкции трубки в уже не может вернуться в уравновешивающую ячейку, из которой она вышла, и переходит по трубке д в следующую секцию. Таким образом, за один цикл верхняя фаза проходит по одной трубке системы, где каждый раз происходит ее уравновешивание. Затем в первую ячейку вносят новую порцию верхней фазы, и весь процесс повторяют сначала. Полный цикл уравновешивания, отстаивания и переноса фаз обычно продолжается 1—2 мин; встряхивание и пере- -ворачивание ячеек осуществляется как ручным, так и механическим способом.
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 112 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed