Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
арабйнозы
ara С ara С~
1000
1
А. Можно ли по данным табл. 10-1 судить о том, негативную или
позитивную регуляцию арабинозного оперона осуществляет белок araCl
Б. Как выглядели бы цифры в табл. 10-1, если бы белок осуществлял
регуляцию противоположного типа?
10-5 Клеточная линия эмбриональных фибробластов мыши ЮТ 1/2 (10 Т с
половиной) представляет собой весьма стабильную линию, клетки которой
проявляют свойства фибробластов. Однако если клетки этой линии
инкубировать в течение 24 ч в среде, содержащей 5-азацитидин (5-аза-С),
то при высокой плотности культуры они начнут дифференцироваться в клетки
хряща, жировые или мышечные клетки. (Обработка 5-аза-С снижает общий
уровень
11-1428
метилирования ДНК, что способствует активации ранее неактив-| ных
генов.) Если после обработки клетки растут в условиях низков! плотности
культуры, то они вначале сохраняют свои исходные! свойства фибробластов,
но все же дифференцируются позже, когда проходит много поколений и
культура достигает высокой плотности. Клетки ЮТ 1/2, не обработанные 5-
аза-С, не дифференцируются, какой бы ни была плотность культуры.
При дифференцировке обработанных клеток около 25% из них
превращаются в мышечные клетки (миобласты). Высокая частота образования
миобластов наталкивает вашего руководителя на мысль, что всю
трансформацию может запускать единственны!1 главный ген-регулятор,
который в норме находится в репрессированном состоянии вследствие
метилирования. Чтобы это проверить, руководитель уговаривает вас провести
дорогостоящую I поисковую работу: проклонировать этот ген! Вы
предполагаете, что ген до обработки 5-аза-С находится в выключенном
состоянии и включается лишь в индуцированных миобластах. Если это
предположение правильно, то среди кДНК-копий с мРНК, синтезируемых после
обработки 5-аза-С, должны обнаружиться после-; довательности,
соответствующие этому гену.
Вам необходимо проверить имеющуюся библиотеку кДНК дш нормальных
миобластов (которые в соответствии с вашим предположением также будут
экспрессировать этот ген), используя набор радиоактивных зондов для
идентификации искомых клонов кДНК Вы готовите три радиоактивных зонда.
Зонд 1. Вы выделяете РНК из миобластов, индуцировании 5-аза-С, и
готовите радиоактивные кДНК-копии.
Зонд 2. Вы гибридизуете радиоактивную кДНК для индуцирован ных
миобластов с РНК из необработанных клеток 10Т1/] и удаляете все гибриды
ДНК-РНК.
Зонд 3. Вы выделяете РНК из нормальных миобластов и готовив
радиоактивно меченые кДНК-копии, которые затем гиб; ридизуете с РНК из
необработанных клеток ЮТ 1/2, посд чего удаляете гибриды РНК-ДНК.
,
Первый зонд гибридизуется со многими клонами из библиоте Ки
кДНК, но лишь около 1% из этих клонов гибридизуета с зондами 2 и 3. Всего
вы обнаруживаете четыре различных тши I гибридизации (табл. 10-2).
[•
Таблица 10-2. Гибридизация кДНК-копий РНК миобластов с радиоактиш i
меченными зондами (задача 10-5)
Класс Зонд 1 Зоид 2 Зоид 3
А + _ _
В + --- +
С + + ---
D + + +
А. Для чего проводилась гибридизация меченой кДНК для дву типов
миобластов с РНК из необработанных клеток ЮТ 1/1 Иными словами, зачем
нужны зонды 2 и 3?
Б. Какие общие гены вы ожидаете обнаружить в каждом из четыре классов
кДНК-клонов (А, В, С и D в табл. 10-2)? Какой кла< кДНК-клонов вероятнее
всего содержит последовательной! соответствующие искомому гипотетическому
гену-регулятору?
Контроль генной экспрессии 163
Контроль инициации транскрипции (МБК 10.2)
10-6 Заполните пропуски в следующих утверждениях.
A. Для того чтобы начать транскрипцию, РНК-полимераза связывается
с_______________
Б. Белок-____________ подавляет транскрипцию lac-оперона, связы-
ваясь с определенной последовательностью ДНК, называемой оператором,
которая перекрывается с промотором.
B. При связывании белка-___________с определенной последователь-
ностью ДНК ген выключается. Такой тип регуляции называется
Г. При____________контроле белок-______________связывается с опре-
деленной последовательностью ДНК, что способствует транскрипции
близлежащего гена.
Д. Белок-____________ дает возможность клеткам Е. coli использо-
вать альтернативные источники углерода в том случае, когда
отсутствует его предпочтительный источник-глюкоза.
Е. _________________-это одна из пяти основных полипептидных цепей
РНК-полимеразы, которая функционирует при инициации и отделяется от
ДНК, как только полимераза начинает синтез РНК.
