Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
ДНК
3' ^ 5'
мРНК
Г ибридизация с меченой ДНК
Б. Удлинение затравки 5' мРНК
t
Кэп
Олигонуклеотид
\
Г ибридизация с меченым олигонуклеотидом
I Обработка нуклеазой S1
Кипячение
Копирование
обратной
трамскриптазой
Кипячение
штата -*---ш
156 Глава 9
Рис. 9-30. Последовательности РНК и ДНК для генов актина и генов лидерных
РНК (задача
9-33). В последовательностях ДНК подчеркнут сайт начала трансляции генов
актина (ATG). В последовательностях РНК подчеркнут сегмент лидерной РНК,
присутствующий на 5'-концах актиновых генов и генов лидерных РНК. 5'-
нуклеотид РНК (X) нельзя определить методом удлинения затравки.
Ген 1 актина
ДН К: 5 ' TATTATCAATTTAATTTTTCAGGTACATTAAAAACTAATCAAAATG
РНК: 5' XCTTTTTTAAmiACCCAAGUnURAGGUACAUUAAAAACUAAUCAAAAUG
Ген 2 актина
ДНК: 5' ATAATTCATAATTATTTTGTAGGCTAAGTTCCTCCTAATCTAATAAATCATG
РНК: 5' XGUmiAATOACCCAAGUUUGAGGCUAAGUUCCUCCUAAUCUAAUAAAUCAUG
Ген 3 актина
ДНК: 5' TATTATCAATTTAATTTTTCAGGTACATTAAAAACTAATCAAAMfi
РНК: 5' XGUUUAAUUACCCAAGUUUGAGGUACAUUAAAAACUAAUCAAAAUG |
I
Ген, кодирующий лидерную РНК |
ДНК: 5' GGTTTAATTACCCAAGTTTGAGGTAAACATTCAAACTGA {
РНК; 5' XGUUUAAUUACCCAAGUUUGAGGUAAACAUUCAAACUGA |
гена вы обнаруживаете, что каждая из этих мРНК на своем-5'-конце
содержит одну и ту же последовательность, состоящую из{ 20 нуклеотидов и
некомплементарную последовательности гена[ (рис. 9-30).
|
Используя олигонуклеотид, комплементарный этому лидер-ному
сегменту РНК, вы обнаружили, что соответствующая последовательность ДНК в
хромосоме 5 повторена около 100 раз, однако этот кластер расположен
довольно далеко от генов, кодирующих актин. Этот лидерный ген кодирует
РНК размером около 100 нуклеотидов. 5'-Конец этой лидерной РНК идентичен
сегменту, присутствующему на 5'-конце актиновых мРНК (рис. 9-30).
A. Принимая во внимание, что лидерная РНК и актиновые мРНК соединяются
путем обычного сплайсинга, укажите на рис. 9-30,; какие точки РНК
являются наиболее вероятными местами сплайсинга.
Б. Если ген, кодирующий лидерную последовательность, и актиновые гены
1, 2 и 3 расположены на одной хромосоме, почему не может быть так, что
транскрипция начинается с гена, кодирующего; лидерную последовательность,
и продолжается на генах актина, причем образуется РНК-предшественник,
который затем сплайси-руется с образованием актиновых мРНК?
B. Как можно объяснить способ образования актиновых мРНК с общей
лидерной последовательностью?
9-34 Многие гены высших эукариот содержат большое число экзонов, Для
правильного сплайсинга таких генов необходимо, чтобы j соседние экзоны
соединялись друг с другом. Если этого не про- :< изойдет, экзоны выпадут.
Поскольку все 5'- и все З'-сайты сплайси-рования выглядят одинаково, то
кажется удивительным, что прн сплайсинге пропуски экзонов происходят
весьма редко. Очевидно, должен существовать какой-то механизм, который
хранит отпе-чатки соседних экзонов и обеспечивает их правильное
соединение, Одно из предположений, объясняющих механизм сохранения
определенного порядка экзонов при сплайсинге, состоит в том, что
структуры, осуществляющие сплайсинг, связываются с сайтом сплайсинга на
одном конце интрона и сканируют весь интрон в поисках второго сайта
сплайсинга на другом конце. Подобный механизм мог бы гарантировать, что
экзон никогда не будет. пропущен. Вы очень заинтересовались этим
предположением и ре- > шили его проверить. Для этого вы конструируете два
мини-гена: f
А. м
С
Б, Mi
С
5
Рис. 9-31 рованньк ния интр
(задача 1 содержи! мини-ген 5'-сайта < никами \ заштрихс части экэ З'-
сайты синге.
Клеточное ядро 157
А. Мини-ген 1
5' 3' 3'
Б, Мини-ген 2
5' 5' 3'
Ряс. 9-31. Мини-гены, сконструированные для изучения сканирования
нитронов при сплайсинге РНК (задача 9-34). Мини-ген 1 (А) содержит два
З'-сайта сплайсинга; мини-ген 2 (Б) содержит два 5'-сайта сплайсинга;
прямоугольниками изображены целые экзоны; заштрихованными фигурами -части
экзонов. Указаны 5'- и З'-сайты соединения при сплайсинге.
один с дуплицированным 5'-сайтом и другой с дуплицированным З'-сайтом
сплайсинга (рис. 9-31). Вы вводите эти гены в клетки и анализируете
образовавшиеся на них РНК, чтобы определить, какой из 5'- и 3'-сайтов
