Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
Клеточное ядро 145
Рве. 9-19. Уровни амплификации в областях хромосомы, которые окружают
кластер генов, кодирующих белки хориона (задача 9-21).
Рк.9-20. Распределение вирусной ДНК по плотности после введения ее в
оплодотворенные яйца лягушки (задача 9-22). А. Результаты, полученные
после одного клеточного цикла. Б. Результаты, полученные после двух
клеточных циклов. Фракции с большей плотностью ("тяжелые") расположены
слева; фракции с меньшей плотностью ("легкие")-справа. Возможность
специфически определять только вирусную ДНК достигнута следующим
методическим приемом: яйца перед инъекцией подвергли интен-явному
облучению ультрафиолетовым светом, чтобы блокировать репликацию хромосом.
амплификации в области кластера генов, кодирующих белки хориона,
можно определить, используя клонированные зонды, содержащие все
последовательности ДНК из этой области. Измерение относительных
интенсивностей зон на радиоавтографе (рис. 9-18) показало, что
амплификация кластера генов, кодирующих белки хориона, на хромосоме 3
достигает максимума в области данных генов, но распространяется также и
на участки протяженностью примерно 50 т.п. н. с каждой стороны этого
кластера (рис. 9.19).
Последовательность ДНК, ответственная за амплификацию кластера
генов, кодирующих белки хориона,-это сегмент размером 510 нуклеотидов,
находящийся непосредственно перед одним из генов хорионических белков.
Если перенести этот сегмент в другое место в геноме (с помощью
транспозонов, переносящих ДНК), то образовавшиеся новые сайты в
фолликулярных клетках тоже начинают амплифицироваться. Причем, по-
видимому, этот элемент, контролирующий амплификацию, не транскрибируется
и его белковый продукт не синтезируется.
A. Изобразите, как может выглядеть ДНК из амплифицирующегося кластера
под электронным микроскопом.
Б. Сколько циклов репликации необходимо для достижения 60-кратной
амплификации?
B. Каким образом, по вашему мнению, этот элемент размером 510
нуклеотидов может способствовать избыточной репликации кластера генов
хорионических белков?
9-22 Оплодотворенные яйца (икринки) лягушки служат удобным объектом для
изучения регуляции синтеза ДНК в ходе клеточного цикла. В яйца можно
ввести чужеродную ДНК и изучать ее репликацию независимо от репликации
хромосомной ДНК. Например, в одной из работ в яйца была инъецирована
вирусная ДНК, меченная 3Н. Затем их инкубировали в присутствии 32P-dCTP и
немеченого бромдезоксиуридинтрифосфата - аналога тимидина, увеличивающего
плавучую плотность ДНК, в которую он включился. Инкубация продолжалась в
течение достаточно длительного промежутка времени, чтобы успели пройти
один или два клеточных цикла. Затем вирусную ДНК выделяли из яиц и
анализировали в градиенте плотности CsCl, где можно разделить ДНК,
содержащую 0, 1 или 2 цепи, включившие 5-бромурацил-дезоксирибозид
(БУДР). На рис. 9-20, А и Б показано распределение вирусной ДНК по
плотности после инкубации в течение соответственно одного и двух
клеточных циклов. Если яйца инкубировали в присутствии циклогексимида
(ингибитор белкового
а. один клеточный цикл
Б. ДВА КЛЕТОЧНЫХ ЦИКЛА
•10-1428
синтеза), то результаты, полученные после одного и после двух
клеточных циклов, были одинаковыми (рис. 9-20,А).
A. Объясните, как три пика плотности на рис. 9-20 связаны с репликацией
инъецированной ДНК. Почему в "легком" пике не присутствует
радиоактивность 32Р, а "тяжелый" не содержит 3Н?
Б. Имитирует ли инъецированная ДНК ожидаемое поведение хромосомной ДНК?
B. Как вы полагаете, почему циклогексимид препятствует появлении: пика
ДНК с наибольшей плотностью?
Синтез и процессинг РНК (МБК 9.4)
9-23 Заполните пропуски в следующих утверждениях. ¦
A. Транскрипция начинается, когда молекула____________связываете!
с промоторной последовательностью ДНК. f
Б. Сигма-субъединица РНК-полимеразы Е. coli играет особую рол
в транскрипции, являясь _____________: она позволяет фермент;
находить обобщенную последовательность промотора Е. coli. |
B. После того как синтезируются первые восемь нуклеотидов молеку|
лы РНК, сигма-субъединица отделяется, и вместо нее с фермента";
соединяется несколько____________ f
очень мелкие стабильные РНК.
Д. Для образования активного промотора с ДНК должны связать ся один или
более сайт-специфических белков, которые назьь
ваются____________
Е. TFIID, необходимый для многих промоторов РНК-полимеразь
II, представляет собой крупный белковый комплекс, которьп
обычно называют ______________, так как он может связыватьа
с консервативной АТ-богатой последовательностью, называемо!;
Ж. У эукариот молекулы РНК-полимеразы начинают и заканчиваю;
транскрипцию в определенных сайтах хромосомы. Область межд); этими
сайтами называется_________________.
3. Транскрипты, образуемые в ядре РНК-полимеразой II, известш
