Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 85

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 79 80 81 82 83 84 < 85 > 86 87 88 89 90 91 .. 308 >> Следующая

измеряет^ интенсивность полос многих специфических фрагментов, образо!
вавшихся при рестрикции, и выражаете результат как отношение!
интенсивности полос фрагментов из политенных хромосом к ии-; тенсивности
полос соответствующих им фрагментов из диплоид! ных тканей (рис. 9-13).
?
Подтверждают ли ваши результаты предположение о том, что| в
основе различия между дисками и междисковыми участкам! лежит
дифференциальная репликация, или же данные говорят! в пользу различий в
упаковке? |
Рис. 9-12. Р
ный при ан гибридизац] хромосом ( (D) (задача обозначают менты ДН1
качестве зо] менты изуч щей длину фрагмент 2 генома, он ровки коли ного
на rej
Рис. 9-13. |
ДНК в ра: из диплом, ных хроме мент хром клонирова фрагмента нем указаг
и диски. К ты изобра отмечено ] тов 2851 фрагменто уровней ег политеннь:
диплоиднь
Клеточное ядро 139
2851 2148 2842 2148
Р D Р D Р D Р D
9-15
Рис. 9-12. Радиоавтограф, полученный при анализе методом блот-
гибридизации ДНК из политенных хромосом (Р) и диплоидных тканей (D)
(задача 9-14). Числа наверху обозначают клонированные фрагменты ДНК,
использованные в качестве зондов: 2851 и 2842-фрагменты изучаемой
области, имеющей длину 315 т. п. н. (см. рис. 9-13); фрагмент 2148-из
другой области генома, он использован для калибровки количества ДНК,
нанесенного на гель.
Рве. 9-13. Соотношение количеств ДНК в разных участках хромосом из
диплоидных тканей и политенных хромосом (задача 9-14). Сегмент хромосомы,
покрываемый клонированными рестрикционными фрагментами, изображен внизу,
на нем указаны хромосомные области и диски. Клонированные фрагменты
изображены над хромосомой, отмечено расположение фрагментов 2851 и 2842.
Над каждым фрагментом указано отношение уровней его гибридизации с ДНК из
политенных хромосом и с ДНК из диплоидных тканей.
г#
1,0
Для выяснения взаимосвязи между структурой хроматина и экспрессией
гена вы изучаете два типа клеток цыпленка. Эритроциты цыпленка
экспрессируют большие количества глобиновой мРНК, а в фибробластах глобин
вообще не синтезируется. Вы хотите выяснить, в одинаковых или в разных
хроматиновых структурах находятся последовательности ДНК, кодирующие
глобин в этих двух типах клеток. Для изучения структуры хроматина вы
используете две нуклеазы: микрококковую нуклеазу и панкреатическую
дезоксирибонуклеазу I (ДНКаза I).
Вы готовите меченную 3Н-тимидином ДНК (кДНК), комплементарную
глобиновым мРНК из эритроцитов. Эта глобиновая кДНК полностью
расщепляется нуклеазой, узнающей одноцепочечные участки ДНК (нуклеаза
S1). Однако если вначале провести гибридизацию к ДНК с избытком ДНК
цыпленка, то более 90% препарата окажется устойчиво к последующей
обработке нуклеазой S1.
Вы изучаете действие микрококковой нуклеазы и ДНКазы I на
способность ДНК из эритроцитов и фибробластов предохранять кДНК. Чтобы
сохранить природную организацию хроматина, вы обрабатываете нуклеазой
выделенные ядра до того, как экстрагируете ДНК и проводите гибридизацию.
При обработке ядер из эритроцитов или фибробластов микрококковой
нуклеазой (до такого состояния, когда разрушается около 50% ДНК)
получаются препараты ДНК, еще способные защитить от последующего
расщепления нуклеазой S1 более 90% кДНК. Аналогичным образом при
обработке ядер фибробластов ДНКазой I (до такого состояния, когда
разрушается менее 20% ДНК) полученные препараты ДНК предохраняют более
90% кДНК. Однако при такой же обработке ядер эритроцитов ДНКазой I
получаются препараты ДНК, способные предохранить лишь около 25% кДНК. Эти
результаты суммированы в табл. 9-1.
Вы повторяете некоторые из этих измерений, используя вместо
глобиновой кДНК суммарную ДНК из эритроцитов, меченную 3Н-тимидином.
Гибридизация с общей ДНК или с ДНК, обработанной микрококковой нуклеазой,
обеспечивает защищенность более 90% ДНК, меченной 3Н-тимидином, а
гибридизация с ДНК, обработанной ДНКазой I,-всего лишь 78% 3Н-ДНК (табл.
9-1).
В последней серии экспериментов вы сначала получаете препарат
нуклеосом, обрабатывая хроматин микрококковой нуклеазой. ДНК нуклеосом
предохраняет более 90% глобиновой кДНК. После обработки нуклеосом ДНКазой
I получается ДНК, предохраняющая всего лишь 25% глобиновой кДНК. Далее вы
подвергаете нуклеосомы кратковременному воздействию трипсина, чтобы
удалить 20-30 аминокислот с N-конца каждой молекулы гистонов,
дополнительно расщепляете модифицированные нуклеосомы микрококковой
нуклеазой и выделяете ДНК. Такая ДНК
- Политенные/диплоидные
150
Г" 2842 - - --
2851
IIIIII 1 II 1 II 1 1
5 11 12
87 D
1. 2
87 Е-

5, 6 Номер полосы
Таблица 9-1. Защита кДНК глобина и суммарной ДНК из эритроцитов препара-!
Предыдущая << 1 .. 79 80 81 82 83 84 < 85 > 86 87 88 89 90 91 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed