Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
хромосомы инкубировали в присутствии различных комбинаций нуклеотидов,
как указано, и затем обрабатывали BamHI. Полученные фрагменты разделяли с
помощью гель-электрофореза и выявляли методом радио-автографии.
BamHI BamHI
* J
о--------------------------------------------------------о
Теломера Теломера
Меченый dNTP С
Немеченый dNTP dATP dGTP dTTP
ДНК-лигаза
A T G С +
С С С С
- - + +
+ - + +
- + + +
+
13,4 -
3,8 -
1 23456789
ИЛИ dTTP не превышало включение в том варианте, где присутствовал
только dCTP (дорожки 6 и 7).
2. Предварительная инкубация мини-хромосомы с ДНК-лигазой практически
не влияет на включение в концевые фрагменты, но приводит к снижению в
десять раз включения в центральный фрагмент (дорожка 9).
3. В присутствии трех других немеченых dNTP 32P-dCTP включается в
тандемно повторяющуюся последовательность 5-ССССАА-3'.
4. Мини-хромосомы, меченные только 32P-dCTP, при денатурации образуют
одноцепочечные фрагменты, состоящие из 2, 3 или 4 тандемно повторенных
последовательностей ССССАА.
5. Если свободные 5'-фосфаты (не образующие фосфодиэфирной связи) в
мини-хромосомах замещают мечеными фосфатами, а затем обрабатывают так,
чтобы все связи с пуриновыми нуклеотидами разрушились, то основным
меченым фрагментом становится ССС.
6. Если мини-хромосому разрезать рестриктазой Alul, которая расщепляет
ее в участках, расположенных очень близко к концам мини-хромосомы, то при
электрофорезе образуется очень растянутая полоса, содержащая концевой
фрагмент. Ведущий край этой полосы соответствует длине фрагментов около
360 п. н., а край, движущийся медленнее,-фрагментам длиной примерно 520
п. н.
7. Синтез ДНК, начинающийся внутри тандемных повторов ССССАА,
перемещается постепенно в направлении центра мини-хромосомы.
А. Является ли число повторов ССССАА, входящих в состав тело-меры,
фиксированным или оно меняется? Дайти минимальную и максимальную оценку
числа повторов и объясните ход ваших рассуждений.
Б. На каком конце каждой из цепей мини-хромосомы находятся
132 Глава 9
Рис. 9-5. Точечная матрица, позволяющая сравнить ген Р-глобина человека с
кДНК для Р-глобина человека (А) и с геном Р-глобина мыши (Б) (задача 9-
6). Указаны 5'-и З'-концы этих последовательностей. На обеих матрицах
последовательность гена человека одна и та же, кДНК человека (А) короче,
чем ген мыши (Б), поэтому диагональные линии на двух матрицах имеют
разные наклоны.
повторы, на 5'- или на З'-
конце? Объясните, как вы это определили
В. Характер включения метки при синтезе ДНК или при замещении 5'-
фосфатов указывает на то, что не все нуклеотиды в повтор ССССАА связаны
между собой фосфодиэфирными связями. Что можно сказать о природе
одноцепочечных интервалов в повтора! ССССАА на основе различных
наблюдений?
Г. Каково расстояние между одноцепочечными интервалами в повторах
ССССАА?
Д. На основе этих данных изобразите как можно более подробно структуру
теломер рибосомной мини-хромосомы Tetrahymem (Обратите внимание на то,
что последовательность на конщ хромосомы в этих экспериментах не
определяли, а выявлял только структуру повторов ССССАА, из которых
состоит тело мера.)
9-6 Очень удобным графическим методом для сравнения нуклеотид ных
последовательностей служит так называемая точечная матри ца. Пример
использования этого метода приведен на рис. 9-5, где ген Р-глобина
человека сравнивается с кДНК р-глобина человек! (рис. 9-5, А) и с геном
Р-глобина мыши (рис. 9-5, Б). Эти матриц" получают путем сопоставления
блоков последовательностей, и в данном случае блоков из 11 нуклеотидов.
Если совпадает 9 ил более нуклеотидов, на диаграмме ставится точка в
месте пересечения координат, соответствующих сравниваемым блокам. Пр1
сравнении всех возможных блоков получается картина, подобна!
представленной на рис. 9-5, где гомологичные последовательное!!
выявляются как диагональные линии.
A. На основе сравнения гена Р-глобина человека и кДНК р-глобиш
человека (рис. 9-5, А) определите положение экзонов и интроно; в гене Р-
глобина.
Б. Все ли экзоны гена Р-
глобина человека гомологичны экзонам геи Р-глобина мыши (рис. 9-5, ?)?
Выявите и поясните все различии
B. Существует ли гомология между генами Р-глобинов мыши и чело века
помимо той, что относится к экзонам? Если да, то определит! положение
гомологичного участка и объясните, как он мог сохра ниться в ходе
эволюции.
Г. Подвергалась ли длина интронов в каждом из этих гена изменениям при
дивергенции в ходе эволюции? Как можно этг определить?
