Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
pMS12 к S S I А S F F F I L V L R
pMS8 к S S I А F L V L R
pMSO
к
Внутриклеточная сортировка макромолекул 121
2. Вы характеризуете присоединенные цепочки олигосахаридов,
воздействуя на G-белки эндогликозидазой Н (эндо-Н), которая отщепляет
только те N-связанные олигосахариды, которые не достигли определенной
стадии процессинга в аппарате Гольджи (см. МБК, рис. 8-63).
3. Вы определяете, сохраняется ли короткий С-концевой
цитоплазматический домен (который характерен для нормального белка) в
измененных G-белках, для чего обрабатываете выделенные микросомы
протеазой. У нормального G-белка этот домен при обработке отщепляется.
Результаты этих экспериментов суммированы в табл. 8-4.
Таблица 8-4. Результаты опытов, характеризующих распределение G-белков в
нормальных и мутантных клетках (задача 8-34)
Плазмида Локализация в клетке Обработка эндо-Н Обработка
протеазой
pMS20 Плазматическая мем Устойчив Чувствителен
брана
pMS18
pMS16
pMS14 -"- -"~ -"-
pMS12 Внутри клетки +/--- Устойчив -"-
pMS8 Внутри клетки Чувствителен -"-
pMSO Внутри клетки Чувствителен Устойчив
Примечания: Символ +/- в колонке "Обработка эндо-Н" означает, что
только 30% G-белка было чувствительно к ферменту эндо-Н; другие
модифицированные G-белки были либо полностью устойчивы, либо полностью
чувствительны. В колонке "Обработка протеазой" термин "Чувствителен"
означает, что короткий С-концевой домен удаляется при обработке
ферментом. Термин "Устойчив" указывает, что мол. масса G-белка не
изменялась при обработке.
A. Насколько позволяют эти данные, определите внутриклеточную
локализацию каждого измененного G-белка, который не может достичь
плазматической мембраны.
Б. Какова минимальная длина пронизывающего мембрану сегмента у G-белка
VSV, достаточная для закрепления белка в мембране?
B. Какова минимальная длина пронизывающего мембрану сегмента,
необходимая для правильной сортировки G-белка?
Транспорт белков из аппарата Гольджи в лизосомы (МБК 8.8)
8-35 Заполните пропуски в следующих утверждениях.
А. -это ограниченный мембраной мешок с гидролити-
ческими ферментами, предназначенными для регулируемого
внутриклеточного расщепления макромолекул.
Б. Гидролитические ферменты, активные при низком pH, называются
В. Компартмент, в который поступают новосинтезированные лизо-сомные
гидролазы и мембранные белки из аппарата Гольджи,
называется_____________
Г. Деградация отработанных частей клетки может происходить путем
_______________, при которой мембраны, происходящие из ЭР,
122 Глава 8
замыкаются с образованием особой органеллы, _____________, ели
вающейся затем с лизосомой.
Д. Клетки,
специализированные для фагоцитоза, могут поглощаи
микроорганизмы, образуя _____________, которые после слиянв
с лизосомой превращаются в_________ .
Е. Наиболее серьезная из
болезней, связанных с нарушением локали зации лизосомных ферментов,-это
очень редкое заболевание
называемое____________, при которой гидролазы полностью нахо
дятся вне лизосом.
8-36 Укажите, какие из следующих утверждений правильные, а ка кие-нет.
Если утверждение неверно, объясните почему.
_А. В лизосомной мембране действует протонная помпа, использу
ющая энергию гидролиза АТР для того, чтобы выкачивать и: лизосомы
протоны и тем самым поддерживать в ее полоси низкий pH.
_Б. Лизосомы-это разнообразные по форме и размерам органеллы
присутствующие во всех эукариотических клетках, т. е. в клетках
обладающих ядром.
_В. Эндолизосомы превращаются в зрелые лизосомы в результат!
утраты компонентов эндосомной мембраны и дальнейшего сниже ния
внутреннего pH.
_Г. Материал, поглощенный путем эндоцитоза, сразу попадает в лизо
сомы, где его компоненты могут разрушаться до неболыш молекул.
_Д. Лизосомные гидролазы маркируются для направления в лизосомь
группами маннозо-6-фосфата (М6Ф), которые присоединяю(tm) к их N-
связанным олигосахаридам в полости аппарата Гольдж!
_Е. Если обработать клетки таким слабым основанием, как аммонн
или хлороквин, которые повышают pH внутри органелл л нейтрального,
то рецепторы М6Ф будут накапливаться в аппарат! Гольджи, так как они не
могут в таких условиях связыватьо с лизосомными ферментами.
_Ж. Поскольку все молекулы гликопротеинов, которые попадают в аи парат
Гольджи, содержат одинаковые N-связанные олигосахари ды, то сигнал для
