Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 70

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 308 >> Следующая

(задача 8-28). Мембранный белок (незаштрихованный сегмент) расположен у
N-конца, а щелочная фосфатаза (заштрихованный сегмент)-у С-конца
гибридной молекулы. Участки аминокислот, отсутствующих в модифицированных
гибридных белках, указаны перевернутыми V-образными знаками. Ближайшие к
С-концу аминокислоты мембранного белка пронумерованы. Активность щелочной
фосфатазы для каждого гибридного белка указана справа.
Конструкция
плазмид 34
1 С
ВЫСОКАЯ
55
ВЫСОКАЯ
3 С
105
НИЗКАЯ
131

I НИЗКАЯ
225
ВЫСОКАЯ
310
ВЫСОКАЯ
Модифицированные плазмиды /\105
3* 1 Г иааабааоооббагаяя
ВЫСОКАЯ
4* С
5* С
6* С
=/Ч
131
ВЫСОКАЯ
225
НИЗКАЯ
310
НИЗКАЯ
Время, ч
Рис. 8-16. Перенос меченого ФХ от донорных везикул к мембранам
эритроцитов с помощью белка-переносчика ФХ.
Вы выделяете шесть гибридных белков, состоящих из разлю ных
фрагментов мембранного белка и щелочной фосфатазь Структуры этих белков
(с указанием номера для С-концево! аминокислоты мембранного белка) и
уровень активности щелоч ной фосфатазы (высокая или низкая) представлены
на рис. 8-1S В качестве дополнительного теста вы используете два удобв
расположенных участка рестрикции в гене для мембранного белю чтобы
получить делеции фрагментов, с которыми удаляютс кодоны для аминокислот
от номера 68 до номера 103. На рис. 8-1 эти модифицированные плазмиды
также представлены.
A. Какое расположение белка в мембране можно предсказать и данным
графика гидропатии на рис. 8-14? Насколько оно совпада ет с результатами,
полученными на гибридных молекулах?
Б. Как изменяется укладка мембранного белка в случае делеци фрагмента
цепи? Согласуется ли уровень активности щелочш фосфатазы в случае
модифицированных плазмид с изменений расположения белка?
B. Находятся ли N- и С-концы полностью сформировавшейся мол кулы
мембранного белка (нормального, негибридного) на одна стороне мембраны?
8-29 Мембраны митохондрий и пероксисом в противоположность др] гим
клеточным мембранам получают новые фосфолипиды в раа воримой форме от
белков-переносчиков фосфолипидов. Одине таких белков, ФХ-переносящий
белок, специфически перенос! фосфатидилхолин (ФХ) между мембранами. Для
измерения акта ности этого белка смешивают "тени" эритроцитов (интактнн
плазматические мембраны без цитоплазмы) с искусственным фосфолипидными
везикулами, содержащими радиоактивно мече" ный ФХ в обоих монослоях
мембраны везикулы. После инкубащ при 37°С смесь быстро центрифугируют,
так что тени оседают i дне пробирки, а везикулы остаются в супернатанте.
Величщ обмена рассчитывают путем измерения радиоактивности теней, На рис.
8-16 представлены результаты такого эксперименте где использовались
меченые везикулы (доноры ФХ с наружны радиусом 10,5 нм и толщиной бислоя
4,0 нм. В отсутствие бели
Внутриклеточная сортировка макромолекул 117
переносчика никакого обмена не происходило, но в присутствии этого
белка до 70% меченого ФХ из везикул переносилось в мембраны теней
эритроцитов.
Для выяснения того, почему переносилось только 70% метки везикул-
доноров, было поставлено несколько контрольных экспериментов.
1. Концентрация мембран теней эритроцитов в опыте была увеличена в
пять раз, однако обмен по-прежнему остался на уровне 70%.
2. Свежевыделенный белок-переносчик был вновь добавлен через 1 ч,
но это не привело к увеличению обмена.
3. Меченые липиды, остающиеся в везикулах-донорах, в конце реакции
были проэкстрагированы и из них были получены свежие везикулы. И опять
только 70% метки из этих везикул переходило в тени.
Если тени эритроцитов, помеченные в этих опытах, использовали в
качестве мембран-доноров в обратном эксперименте (т.е. для переноса ФХ от
мембран эритроцитов к синтетическим везикулам), то до 96% метки
переходило в акцепторные везикулы.
A. Какие возможные объяснения 70%-ного предела можно исключить на
основании данных каждого из трех контрольных экспериментов?
Б. Как вы думаете, чем объясняется 70%-ный предел?
B. Как вы считаете, почему почти 100% метки может переноситься из
мембран эритроцитов обратно в везикулы?
Аппарат Гольджи (МБК 8.7)
8-30 Заполните пропуски в следующих утверждениях.
A. ___________, локализованный обычно вблизи клеточного ядра,
представляет собой набор уплощенных, ограниченных мембранами
цистерн.
Б. Стопка Гольджи имеет две разные стороны:______________, которая
тесно связана с переходными элементами ЭР, и____________, кото-
рая переходит в трубчатый ретикулум, называемый транс-сетью
Гольджи.
B. Углеводные цепи, присоединенные к остаткам аспарагина в белках,
называются______________
Г. К олигосахаридам с___________ в аппарате Гольджи не добавляются
новые сахара, тогда как к олигосахаридам
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed