Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 6

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 < 6 > 7 8 9 10 11 12 .. 308 >> Следующая

цепи. Выберите из графиков на рис. 5-3 один, который указывал бы на
значительную остановку рибосомы где-то в середине ее движения по мРНК.
Рис.
теор<
pe3yj
(зада
Основные генетические механизмы 13
Рис. 5-4. Динамика синтеза белка ВТМ в лизате ретикулоцитов кролика
(задача 5-7). В первые три минуты радиоактивность не определяли,
поскольку короткие пептиды выходили за пределы столбика геля.
А. Фактический результат
Время
Рис. 5-5. Фактические (А) и теоретически предсказанные (Б) результаты
опыта по синтезу белка (задача 5-7).
5 10 15 20 25
30

мг, кДа
116 -97 -

68 -

56 -

40 -
31 -
20 -
5 10 15 20 25 30
Время отбора пробы, мин
5-7 Скорость роста пептидных цепей можно оценить по данным,
представленным на рис. 5-4. В этом опыте единственный вид мРНК ВТМ,
кодирующей белок массой 116000 Да, транслировался в лизате ретикулоцитов
кролика в присутствии 358-метионина. Пробы отбирали с интервалами в одну
минуту и анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
Продукты трансляции определяли с помощью радиоавтографии. Как следует из
рисунка, размер наиболее крупных пептидов увеличивается с продлением
периода трансляции.
A. Линейна ли скорость синтеза во времени? Простой способ оценки
линейности скорости синтеза в этом опыте заключается в том, чтобы мол.
массы стандартных пептидов, отмеченные по оси ординат на рис. 5-4,
отложить на графике против моментов времени, когда в пробе
синтезировались наиболее крупные пептиды, равные им по массе.
Б. Какова скорость синтеза белка (число аминокислот/мин) в этом
эксперименте? Исходите из того, что средняя мол. масса аминокислоты равна
110.
B. Почему на радиоавтограмме так много полос и количество их продолжает
возрастать с продлением периода трансляции, т. е. почему на практике
получается такой "действительный" результат, а не "теоретический",
изображенный на рис. 5-5? Можете ли вы придумать такие экспериментальные
условия, которые привели бы к получению "теоретической" кривой?
5-8 Кодоны терминации у бактерий узнаются одним из двух белков: фактор 1
(RF1) узнает UAG и UAA, фактор 2 (RF2)-UGA и UAA. Молекулярные механизмы
узнавания этими белками стоп-кодонов и окончания синтеза полипептидной
цепи пока неизвестны. В то же время недавно были клонированы и
секвенированы гены для факторов 1 и 2. При сопоставлении нуклеотидной
последовательности гена для RF2 с аминокислотной последовательностью
этого белка был обнаружен неожиданный результат, относящийся к
последовательностям, приведенным под картой гена на рис. 5-6.
Последовательности этого гена и белка были тщательно проверены, чтобы
исключить возможность каких-либо ошибок.
14 Глава 5
Рис. 5-6. Схематическое изображение гена для белка RF2 (задача 5-8).
Кодирующая последовательность изображена жирной линией; приведены
последовательности нуклеотидов на ее концевых участках.
М F Е I ATGTTTGAAATT
А Р G * GCACCGGGGTAG
500
1000

GGGTATCTTTGACTACGACGCC G Y L D Y D R
А. В чем состояла неожиданность результата?
Б. На какое предположение относительно регуляции экспрессии гена белка
RF2 наталкивают эти данные?
5-9 Измерить общую точность белкового синтеза чрезвычайно трудно. Это
объясняется отчасти тем, что его точность очень высока и, следовательно,
ошибки крайне редки, а также тем, что клетки обычно быстро ликвидируют
допущенные ошибки. Существуют и технические проблемы. Например, насколько
точно можно идентифицировать какой-либо белок, безусловно отличающийся от
белка, для которого вам известны условия очистки и критерии
идентификации?
Один остроумный подход к этой проблеме основан на использовании
белка флагеллина (мол. масса 40000), который заведомо является
единственным белком бактериальных жгутиков. Флагел-лин обладает двумя
достоинствами. Во-первых, жгутик (а следовательно, и флагеллин) может
быть отделен от клеток бактерий и очищен с помощью дифференциального
центрифугирования. Во-вторых, в этом белке нет цистеина, что позволяет с
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 < 6 > 7 8 9 10 11 12 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed