Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
постепенно удаляются из клетки в результате работы (Na+ + К+)-насоса, так
что подкисление косвенно обеспечивается гидролизом АТР.
Трансферрин - белок, ответственный за перенос ферритина внутрь клеток.
5-1428
__К. Рецепторы трансферрина не подвергаются гидролизу в лизосомах,
поскольку они устойчивы к протеолизу при низком pH.
__JI. Рецепторы для ФРЭ на поверхности клетки собираются в окаймленных
ямках только после связывания с молекулами ФРЭ, тогда как рецепторы ЛНП
поступают в такие углубления даже в отсутствие лиганда.
_М. Окаймленные ямки действуют как молекулярные фильтры, собирая
определенные белки плазматической мембраны и отсеивая другие белки.
__Н. Важное различие между эндоцитозом, опосредуемым рецепторами, и
фагоцитозом состоит в том, что первый идет постоянно и независимо от
присутствия лигандов в среде, тогда как второй-только в том случае, если
клетка сталкивается с чем-то пригодным для питания.
__О. Поскольку фагоцитоз подавляется цитохалазинами, а эндоцитоз,
опосредуемый рецепторами,-нет, по-видимому, именно в фагоцитозе, а
не в опосредуемом рецепторами эндоцитозе участвует актин.
__П. Вирусы гриппа, относящиеся к группе вирусов, имеющих оболочку,
проникают в клетки в процессе эндоцитоза, опосредуемого рецепторами, и
вследствие низкого pH в эндосоме в оболочке вируса активируется особый
гликопротеин, индуцирующий слияние мембран.
6-30 Вас интересует экзоцитоз и эндоцитоз в культивируемых клетках
печени, которые секретируют альбумин и поглощают трансфер-рин. Чтобы
различить эти два события, следует добавить в среду трансферрин, меченный
коллоидным золотом, а затем через несколько минут зафиксировать клетки,
после чего приготовить тонкие срезы и обработать их антителами (меченными
феррити-ном) против альбумина. Коллоидное золото и ферритин-вещества
высокой электронной плотности и поэтому легко идентифицируются при
электронной микроскопии, кроме того, их легко отличить друг от друга по
размеру и плотности частиц.
А. Позволяет ли этот опыт идентифицировать везикулы, относящиеся к
механизмам экзо- и эндоцитоза? Каким образом?
Б. Не все везикулы, меченные золотом, покрыты клатрином. Почему?
6-31 Оборот мембранных рецепторов трансферрина изучали с помощью
изотопной метки, которую вводили в рецепторы, расположенные на
поверхности клетки, чтобы определить их дальнейшие превращения в условиях
инкубации при 0 и 37°С. Интакт-ные клетки обрабатывали радиоактивным
иодом при 0°С в условиях, благоприятных для мечения белков клеточной
поверхности. Если после этого клетки инкубировали на льду и затем
обрабатывали трипсином, который разрушает рецепторные участки, не нарушая
целостности клетки, то радиоактивно меченные рецепторы трансферрина
полностью разрушались. (Немеченые рецепторы к трансферрину выявлялись как
отдельное пятно после разделения клеточных белков путем двумерного
электрофореза в полиакриламидном геле.) Если же клетки сначала
инкубировали при 37°С в течение 1 ч, а затем обрабатывали трипсином (на
льду), то в соответствующем пятне обнаруживалось около 70% первоначальной
радиоактивности. Сама по себе инкубация при обеих температурах, судя по
результатам электрофореза, не вызывала повреждения большей части
рецепторов.
Второй препарат
клеток, поверхность которых была помечена
Плазматическая мембрана 67
:омах,
жайм-
тогда
отсут-
соби-
сеивая
цепто-
оянно
вто-
гем-то
итоз,
фаго-
твует
эолоч-
¦емого
злочке
слия-
летках сфер- • среду ; через говить ррити- > -веще-ггифи- : легко I
ициеся
зчему?
с по-распо-даль-нтакт-0°С в оверх-затем участ-генные гченые I после
|>ореза эовали льду), перво-обеих !ывала
мечена
7 мин
Рис. 6-12. Фракция меченого рецептора трансферрина, устойчивая к
трипсину, как функция времени после мечения (задача 6-32). Штриховой
линией показана начальная скорость погружения.
при 0°С, а инкубация проведена при 37°С в течение 1 ч,
анализировали с помощью антител к трансферрину. Если для реакции
использовали интактные клетки, то с антителами связывалось
0,54% меченых белков. Если клетки сначала обрабатывали детергентом,
то 1,76% меченых белков оказывались связанными с антителами.
А. Почему при обработке трипсином разрушаются меченые рецепторы
трансферрина (но большая часть рецепторов не повреждается), если клетки
выдерживают на льду? Почему меченые рецепторы становятся устойчивыми к
трипсину, когда клетки инкубируют при 37°С?
Б. Какая доля всех рецепторов трансферрина находится на поверхности
клетки после инкубации в течение 1 ч при 37°С? Согласуются ли результаты
этих двух экспериментальных подходов?
6-32 Среднее время, за которое рецепторы трансферрина проходят цикл от
поверхности клетки в эндосомы и обратно к поверхности, было определено
путем мечения рецепторов на поверхности клетки радиоактивным иодом при
0°С и изучения их дальнейшей судьбы при 37°С. В различные моменты времени
