Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
белки мигрируют со скоростью, обратно пропорциональной их s
молекулярной массе: чем крупнее молекулы белка, тем сильнее они |
тормозятся сложной пространственной сеткой геля и тем медлен- § нее
продвигаются от старта. с
__Д. Эритроциты человека не имеют никаких других внутренних мембран,
кроме ядерной мембраны.
__Е. Определить, что мембранный белок экспонирован с наружной
стороны плазматической мембраны, можно с помощью ковалентно
связанной метки или протеолитического гидролиза, но только в том случае,
если мембрана остается неповрежденной. t
__Ж. Спектрин, анкирин, белок полосы 3, белок полосы 4,1 и актин g
связаны друг с другом нековалентно на внутренней поверхности |
мембраны эритроцита, за счет чего образуется сетеподобная струк- § тура,
которая, как теперь считают, обеспечивает поддержание с двояковогнутой
формы этих клеток.
__3. Каждая молекула бактериородопсина имеет в своем составе одну
хромофорную группу, называемую ретиналем; ее активация фотоном
света вызывает конформационное изменение молекулы белка, приводящее к
выходу из клетки протонов.
__И. Подвижность мембранных белков может быть ограничена в результате
взаимодействия их со структурами, находящимися либо вне, либо внутри
клетки.
__К. Участки мембраны могут различаться по составу белков, однако пока
нет данных об участках мембраны, различающихся по составу липидов.
6-10 Какие из показанных на рис. 6-5 типов связывания белков с мембраной
обнаружены в биологических мембранах?
Плазматическая мембрана 53
Рис. 6-5. Разнообразие возможных связей белков с мембраной (задача 6-10).
д
ПРОСТРАНСТВО
Белок
ЦИТОПЛАЗМА
А НОРМАЛЬНЫЕ "ТЕНИ"
Спектрины
I Белок
I полосы г ЛИКофорин
\ 4 /(окраска сиаловой * кислоты)
Б "ТЕНИ" ПОСЛЕ ОБРАБОТКИ СИАЛИДАЗОЙ________________
Спектрины
8 "ТЕНИ" ПОСЛЕ ОБРАБОТКИ ПРОНАЗОЙ
200 100 70 20
Молекулярная масса, тыс.
Рис. 6-6. Анализ белков, входящих в состав теней эритроцитов, до и после
гидролиза сиалидазой и проназой (задача 6-12). Белки, связанные с
мембраной, выделены с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с
ДСН, а затем окрашены на белок и на углеводы. Линиями показано
распределение белков, серым цветом обозначено распределение углеводов.
6-11 Белки, пронизывающие мембрану, обладают характерной структурой в
области бислоя. Какая из трех приведенных последовательностей, состоящих
из 20 аминокислот, более всего подходит на роль такого трансмембранного
сегмента и подходит ли какая-то из них вообще? Объясните причины вашего
выбора.
A. ITLIYFGVMAGVIGTILLIS Б. ITPIYFGPMAGVIGTPLLIS
B. ITEIYFGRMAGVIGTDLLIS
6-12 Для определения того, с какой стороной плазматической мембраны
связаны основные мембранные белки -спектрин, белок полосы
3 и гликофорин, первоначально применяли ферментативный гидролиз
теней эритроцитов. В этих опытах использовали сиалидазу, которая
отщепляет остатки сиаловой кислоты от белка, и прона-зу- для расщепления
пептидных связей. Белки из нормальных теней и из теней, обработанных
ферментом, разделяли с помощью электрофореза в ДСН-полиакриламидном геле,
а затем окрашивали на белки либо на углеводы (рис. 6-6).
A. Каким образом информация, содержащаяся в рис. 6-6, позволяет решить,
на какой стороне клеточной мембраны находится углеводная часть
гликофорина: на внутренней, цитоплазматической или на наружной, и какие
из белков эритроцитов экспонированы на наружной поверхности последних?
Б. Вы представляете свои соображения коллеге, но она оспаривает ваше
заключение о том, что некоторые из этих белков не экспонированы на
наружной поверхности, и предполагает вместо этого, что они устойчивы к
гидролизу препаратами проназы. Какой контрольный эксперимент вы могли бы
предложить для проверки такой возможности?
B. Как следовало бы модифицировать методику с использованием ферментов
для выявления тех белков эритроцитов, которые пронизывают плазматическую
мембрану?
6-13 Расчеты количества белков, связанных с мембраной, на клетку и доли
поверхности плазматической мембраны, занятой этими белками, важны для
понимания структуры плазматической мембраны. Для белков плазматической
мембраны эритроцитов это вычислить наиболее просто, поскольку эритроциты
легко выделить из крови и в них не содержится внутренних мембран, которые
могли бы служить помехой при расчетах. С этой целью выделяют
плазматические мембраны, после чего белки, связанные с мембранами,
разделяют методом электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН, а затем
окрашивают красителем Кумасси синим. Поскольку интенсивность окраски в
первом приближении пропорциональна количеству белка в полосе, то можно
количественно определить белки, как показано в табл. 6-3.
54 Глава 6
Рис. 6-7. Схема расположения белка полосы 3 (показан в виде цилиндра) в
плазматической мембране (задача 6-13).
Таблица 6-3. Доля красителя, связанного с тремя белками (задача 6-13)
