Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
зерен серебра на меченую клетку достигает уровня насыщения, т.е. эта фаза
наступает примерно за 10 ч до митоза. Поскольку фаза G2 продолжается
около 3 ч, фаза S должна занимать примерно 7 ч.
Если длительность фазы М составляет 1 ч, фазы S - 7 ч и фазы G2-
от 3 до 4 ч, то фаза G, должна продолжаться от 8 до 9 ч.
Литература: Stanners, С. P.; Till, J.E. DNA synthesis in individual
L-strain mouse cells. Biochim. Biophys. Acta 37,406-409, 1960.
474 Глава 13
13-5
А. Во время второй тимидиновой блокады в популяции будут накапливаться
клетки, находящиеся в начале фазы S, поскольку синтез ДНК невозможен.
Таким образом, после отмывания от тимидина во второй раз
синхронизированная популяция будет находиться в фазе S.
Б. Во время первой тимидиновой блокады тормозится цикл у всех клеток,
находящихся в фазе S. В остальных клетках цикл проходит нормально до
начала фазы, где он прекращается. Фазы G2, М и Gj длятся в сумме 15 ч,
поэтому присутствия тимидина в течение 18 ч будет достаточно, чтобы все
клетки, изначально находившиеся не в фазе S, достигли ее начала. Таким
образом, к концу первой тимидиновой блокады большинство клеток популяции
будет в начале фазы S, а остальная часть популяции-в тех или иных точках
фазы S. За 10 ч после снятия первой тимидиновой блокады вся популяция
пройдет фазу S, но ни одна клетка не успеет вступить в нее снова. Когда
наступает вторая тимидиновая блокада, ни одна клетка не находится в фазе
S. За время этой блокады (16 ч) клетки смогут пройти клеточный цикл до
начала фазы S и вся популяция будет находиться в этой части цикла.
На самом деле при тимидиновой блокаде синтез ДНК, по-видимому,
не прекращается полностью, а скорее сильно замедляется. По этой причине
при использовании двойной тимидиновой блокады все клетки популяции не
находятся точно на границе фаз Gx - S, а распределяются в пределах
начального периода фазы S.
Литература: Xeros, N. Deoxyriboside control and
synchronization of mitosis.
Nature 194,682-683, 1962.
Bootsma, D.; Budke, L.; Vos, O. Studies on
synchronous division of tissue culture cells initiated by excess
thymidine. Exp. Cell. Res. 33, 301-309, 1964.
Rao, P. H.; Johnson. R. T. Mammalian cell fusion: I. Studies on the
regulation of DNA synthesis and mitosis. Nature 225, 159-164, 1970.
Bostock, C.J.; Prescott, D.M.; Kirkpatrick, J.B. An evaluation of
the double thymidine block for synchronizing mammalian cells at the G,-S
border. Exp. Cell Res. 68,163-168, 1971.
13-6 Одинаковая длительность фазы S в одном случае у гаплоида и диплоида,
в другом случае у диплоида и тетраплоида - это не столь уж и удивительно.
Если отдельные хромосомы и области внутри хромосом реплицируются в
определенном порядке, to при уменьшении вдвое или удвоении числа хромосом
порядок репликации не должен изменяться. Соотношение между числом генов,
ответственных за механизм репликации (кодирующих ДНК-поли-меразы,
геликазы, факторы инициации и т.д.), и общим количеством ДНК также
сохраняется. Напротив, у разных организмов соотношение между количеством
этих генов и содержанием ДНК скорее всего варьирует, и этим может
объясняться корреляция, на которую указывают данные в табл. 13-1.
Литература: Prescott, D.M. Reproduction of Eucaryotic Cells, pp.
85-86. New York: Academic Press, 1975.
13-7
А. При каждом переносе происходит двадцатикратное разбавление (50
нл/1000 нл), поэтому после 10 переносов степень разбавления достигает
2010 или 1013. Нет оснований предполагать, что при таком разбавлении
биологическое действие соединения не уменьшается.
Б. Появление активности MPF в отсутствие синтеза белка свиде-
Рост и деление клеток 475
тельствует о том, что активируется неактивный предшественник MPF. В
принципе активация может быть связана с одной из посттрансляционных
модификаций, например с расщеплением протеазой или с фосфорилированием.
Предполагается, что MPF активируется за счет фосфорилирования.
В. Чтобы поддерживать свое активированное состояние при
последовательных переносах, MPF должен обладать способностью к са-
моактивации. Если бы, например, эта была протеаза, она могла бы
активировать собственный неактивный предшественник путем расщепления,
подобного расщеплению трипсиногена трипсином с образованием
дополнительного количества трипсина. Однако в случае MPF более вероятно,
что активный MPF действует как протеинкиназа, активируя свой неактивный
предшественник путем фосфорилирования. При этом, по-видимому, совсем
необязательно, чтобы MPF активировал сам себя; он мог бы, например,
активировать другую протеинкиназу, которая в свою очередь активировала бы
предшественник MPF. Тем не менее принцип был бы тот же самый.
Г. Поскольку в незрелом ооците не обнаруживается активности MPF,
последний не может вызывать исходного события активации. По всей
вероятности, белок, синтезируемый в ответ на стимуляцию прогестероном (и,
