Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 236

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 230 231 232 233 234 235 < 236 > 237 238 239 240 241 242 .. 308 >> Следующая

обеим сторонам от точки начала репликации. При снижении концентрации
метки репликация распространялась в обоих направлениях от точки начала
репликации, образуя светлые участки на каждом конце темных участков. Во
втором опыте (рис. 9-14, Б) репликация в точках ее инициации начиналась в
отсутствие 3Н-тимидина, и, таким образом, точка начала репликации
оставалась немеченой. Внесение большого количества метки и последующее
снижение ее концентрации приводили к возникновению темного участка со
светлым фрагментом на одном конце. Соседние темные области
Клеточное ядро 395
Обработка Bglll Обработка Pvul
Рис. 9-39. Превращение реплицирующихся плазмидных молекул в линейные
формы с двумя разветвлениями при обработке Bglll или в линейные формы с
несколько асимметрично расположенными репликационными глазками при
обработке Pvul (ответ 9-19).
фактически являются частями одной и той же реплицирующейся молекулы
ДНК. Между ними лежат немеченые (а потому невидимые) сегменты, содержащие
точки начала репликации.
В. Скорость движения репликативной вилки можно приблизительно
определить, исходя из времени мечения и длины пометившихся областей. В
первом эксперименте участки длиной около 100 мкм метились за 45 мин.
Поскольку в синтезе каждого меченого сегмента участвуют две репликативные
вилки, то каждая из них за 45 мин синтезирует примерно 50 мкм ДНК. Таким
образом, скорость движения репликативной вилки равна приблизительно
1,1 мкм/мин (50 :45 = 1,1). Во втором опыте за это время пометались
фрагменты размером около 50 мкм, однако каждый из этих участков был
синтезирован лишь одной репликативной вилкой. Таким образом, скорость
продвижения репликативной вилки здесь также равна примерно 1,1 мкм/мин
(50:45 = 1,1).
Этих данных недостаточно, чтобы определить время, необходимое для
репликации всего генома. Не хватает сведений о числе активных точек
начала репликации и их распределении.
Литература: Huberman, J.A.; Riggs, A.D. On the
mechanism of DNA replication in mammalian chromosome. J. Mol. Biol. 32,
327-341, 1968.
9-19
A. В области фрагмента длиной 4,5 т. п. н. гибридизация происходит с
теми плазмидами, которые ко времени выделения ДНК еще не реплицировались.
На то, что большинство плазмидных молекул еще не реплицировалось,
указывает интенсивность этого пятна. Низкая частота реплицирующихся
плазмидных молекул даже в S-фазе-это один из факторов, которые затрудняют
доказательство того, что ARS представляет собой точку начала репликации.
Б. Результаты, приведенные на рис. 9-16, показывают, что ARS1 служит
точкой начала репликации. Распределение полос в геле при разделении ДНК,
обработанной нуклеазой Bglll, выглядит так, как если бы реплицирующиеся
молекулы имели два разветвления (рис. 9-15, Б). Результаты, полученные
для ДНК, обработанной Pvul, выглядят как зоны, образованные промежуточной
репликативной формой, у которой репликационные глазки расположены
асимметрично (рис. 9-15, Г). (Очень короткий "хвост" в пятне,
соответствующем молекулам длиной 9 т.п.н. на рис. 9-16,Б, указывает на
то, что репликационные глазки в реплицирующихся молекулах расположены
немного асимметрично.) Именно такие зоны в геле ожидаются в случае, если
репликация начинается с ARS1. Как показано на рис. 9-39, расщепление
ферментом Bglll, который разрезает последовательность в сайте ARS1,
приводит к образованию молекул с двумя разветвлениями. Обработка Pvul,
которая разрезает кольцевую молекулу примерно против сайта ARS1, приводит
к образованию молекул с несколько асимметрично расположенными
репликационными глазками.
B. Разрыв в дугообразной зоне, содержащей продукты гибридизации с
плазмидами, обработанными Pvul (рис. 9-16,Б), возникает вследствие того,
что формы с разветвлением и формы с реплика-ционным глазком различаются
по подвижности. Молекулы, только что начавшие реплицироваться, при
расщеплении Pvul образуют (|ормы с глазком, а молекулы, в которых
репликация уже прошла сайт Pvul, превращаются в форму с разветвлением.
Таким образом, реплицировавшаяся молекула, разрезанная рестриктазой,
несет либо глазок, либо разветвление, и никаких других промежу-
396 Глава 9
А. РАСПЛЕТАНИЕ НАЧИНАЕТСЯ НЕ В ТОЧКЕ НАЧАЛА РЕПЛИКАЦИИ
Точка начала
репликации
Б. РАСПЛЕТАНИЕ
В ОДНОМ НАПРАВЛЕНИИ
Точка начала репликации
-Р------------------
-jo-
I - -------
I

В. РАСПЛЕТАНИЕ В ОБЕ СТОРОНЫ
Точка начала репликации
-----Ф--------------
-Ф------------------
-<гр>---------------
I
Рис. 9-40. Использование рестрик-таз для локализации сайта расплетания Т-
антигеном относительно точки начала репликации вируса SV40 (ответ 9-20).
Концы линейной молекулы образовались в результате расщепления
рестриктазой.
точных форм нет. Поскольку две формы различаются по подвижности, на
электрофоретической картине виден разрыв.
Предыдущая << 1 .. 230 231 232 233 234 235 < 236 > 237 238 239 240 241 242 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed