Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
B. Ферменты процессинга модифицируют N-связанный олигосахарид по
одному из двух основных путей: они отщепляют или, наоборот, присоединяют
сахара. У мутантов С, Н, D, G и В дефекты относятся к этапам отщепления
сахаров, вероятно, к самим ферментам процессинга. У мутантов Е, F, А и I
имеются дефекты на
Таблица 8-6. Линии мутантных клеток и клеток дикого типа, расположенные
соответственно этапам процессинга олигосахаридов (ответ в-33)
Клеточная Man GlcNAc Gal NANA Glc
Локализация
линия
Мутант С 9 2 0 0 3 ЭР
Мутант Н 9 2 0 0 2 ЭР
Мутант D 9 2 0 0 0 ЭР
Мутант G 8 2 0 0 0 Г
ольджи
Мутант Е 5 2 0 0 0 Г
ольджи
Мутант В 5 3 0 0 0 Г
ольджи
Мутант F 3 3 0 0 0 Г
ольджи
Мутант А 3 4 0 0 0 Г
ольджи
Мутант I 3 4 2 0 0 Г
ольджи
Дикий тип 3 4 2 2 0
В колонке "Локализация" указано, где должен осуществляться тот этап
процессинга,
в котором имеется дефект.
этапах присоединения сахаров. Эти мутанты могут быть дефектны по
ферментам процессинга, но возможно, что их дефекты относятся к одному из
ферментов, ответственных за синтез моносахаридов, или к ферменту,
ответственному за активацию сахара перед его присоединением (например, к
ферменту, синтезирующему UDP-N-ацетилглюкозамин-активированную форму N-
аце-тилглюкозамина), или же к белкам, ответственным за транспортировку
моносахаридов в просвет ЭР либо в аппарат Г ольджи.
8-34
А. Модифицированные G-белки, в которых сегменты, пронизывающие
мембрану, содержат 12, 8 или 0 аминокислотных остатков, не доходят до
плазматической мембраны (табл. 8-4). Присутствие олигосахаридов указывает
на то, что каждый из этих белков погружен в мембрану ЭР. Этого следовало
ожидать, поскольку сигнальный пептид остался без изменений. Наличие
короткого С-концевого домена у тех белков, сегменты которых состоят из 12
или 8 аминокислотных остатков, показывает, что эти белки закреплены в
мембране почти как нормальный G-белок. Напротив, полная устойчивость к
протеазе G-белка, у которого трансмембранный сегмент отсутствует,
доказывает, что белок полностью прошел через мембрану ЭР и находится в
просвете ЭР. Таким образом, G-белки с сегментами из 12 и 8 аминокислотных
остатков удерживаются во внутреннем слое мембраны, а G-белок без этого
сегмента локализован в просвете ЭР.
Частичная устойчивость G-белка, у которого трансмембранный
сегмент состоит из 12 аминокислот, к ферменту эндо-Н "свидетельствует о
том, что некоторая фракция такого G-белка доходит до промежуточного
компартмента аппарата Гольджи, где происходит модификация углеводов в
составе белка, в результате которой олигосахарид становится устойчивым к
ферменту эндо-Н. Остальные молекулы этого белка находятся в мембране ЭР
либо в z/ис-компартменте аппарата Гольджи. Чувствительность к эндо-Н G-
белка с сегментом из 8 аминокислотных остатков или без этого сегмента
показывает, что такие белки не могут пройти через г/мс-компартмент
аппарата Гольджи или вообще не могут выйти из ЭР.
Внутриклеточная сортировка макромолекул 379
Б. Для G-белка VSV минимальная длина трансмембранного сегмента, по-
видимому, составляет 8 аминокислотных остатков или даже меньше; это видно
из того, что трансмембранный сегмент всего из 8 аминокислотных остатков
закреплял модифицированный G-белок практически так же, как закреплен
нормальный G-белок. Этот результат удивителен тем, что цепочка из 8
аминокислотных остатков, уложенная в структуру типа а-спирали, казалось
бы недостаточно длинна, чтобы пересечь мембрану по толщине. Имеется
несколько возможностей: короткие сегменты, проходящие сквозь мембрану,
могут быть полностью вытянуты, а не уложены в виде а-спирали; толщина
мембраны в месте проникновения этих сегментов может быть менее 3 нм;
соседние с этим сегментом части G-белка, включая по крайней мере одну
основную аминокислоту (К или R), могут тоже заходить в мембрану.
В. Минимальная длина трансмембранного сегмента, необходимая для
правильной сортировки G-белка, составляет 13-14 аминокислотных остатков,
так как G-белки с сегментом из 14 аминокислотных остатков направляются к
плазматической мембране подобно нормальным G-белкам, а G-белки с
сегментами из 12 аминокислотных остатков-нет (табл. 8-4). Любопытно, что
