Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 223

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 217 218 219 220 221 222 < 223 > 224 225 226 227 228 229 .. 308 >> Следующая

белок переносится через микросомную мембрану. 1) Белок полностью
чувствителен к протеазе в присутствии детергента (рис. 8-10, дорожка 7),
но только частично чувствителен к протеазе в отсутствие детергента (рис.
8-10, дорожка 6). Таким образом, белок частично защищен от протеазы в
присутствии микросом. 2) Скорость миграции белка возрастает после
обработки его эндогликозидазой Н (рис. 8-10, ср. дорожки
5 и 8), следовательно, сахара связываются с белком, когда он
транслируется в присутствии микросом. 3) Когда сахара удалены, белок
движется при электрофорезе быстрее, чем белок-предшественник (рис. 8-10,
ср. дорожки 1 и 8). Это происходит из-за того, что часть белка-по-
видимому, его сигнальный пептид-отщепляется от предшественника, когда он
транслируется в присутствии микросом
B. Частичная чувствительность белка к протеазе (рис. 8-10, дорожка 6)
показывает, что часть молекулы белка остается на наружной поверхности
микросом. Вместе с данными об отщеплении сигнального пептида и
присоединения N-связываемых сахаров этот результат доказывает, что белок
пронизывает мембрану. Таким образом, белок погружен в мембрану только
частично и в основном заякорен в ней своим сегментом "конца переноса".
8-26
А. Если трансляция происходит в присутствии микросом, в них активно
переносятся белки, транслируемые с каждой из мРНК. Это заключение
основано на результатах обработки протеазой и эндо-Н. Новосинтезированные
белки защищены от действия протеазы, что схематически изображено на рис.
8-12, где белки представлены на всех дорожках с номером 2. При этом все
новосинтезированные белки ковалентно связаны с углеводами, что
подтверждается увеличением их электрофоретической подвижности после
обработки ферментом эндо-Н (рис. 8-12, ср. дорожки
3 и 1 для каждой мРНК).
Б. Транслокация белков, транслируемых с коротких и средних по размеру
мРНК, не сопряжена с трансляцией, так как эти белки могут переноситься в
микросомы, добавленные после завершения
374 Глава 8
А С
Цитоплазма х
2
Просвет т
N
Б N
Цитоплазма 1
шштж 1
Просвет т
С
Просеет
Цитоплазма
Просвет
14
|5
Рис. 8-23. Расположение белков в мембране ЭР (ответ 8-27). Прямоугольники
с номерами соответствуют сегментам, пронизывающим мембрану (см. рис.
8.13).
трансляции. Их перенос в микросомы подтверждается устойчивостью к
действию протеазы и чувствительностью к эндо-Н (рис.
8-12 А и Б, дорожки 5 и 6). Белок, синтезированный на длинной мРНК,
не переносится, если микросомы добавлены после завершения трансляции. На
это указывают измененная электрофоретическая подвижность в отсутствие
какой-либо обработки (рис. 8-12 В, ср. дорожки 1 и 4), а также
чувствительность белка к протеазе (рис. 8-12 Л, дорожка 5) и его
неизмененная подвижность после обработки эндо-Н (рис. 8-12Л, ср. дорожки
4 и 6).
В. Поскольку транслокация может быть разобщена с трансляцией, она не
может осуществляться путем проталкивания синтезируемого полипептида
рибосомой. Таким образом, полученные вами экспериментальные результаты
больше согласуются с представлением о том, что белки протягиваются через
мембрану с помощью механизма переноса. Как было показано на разобщенных
системах, подобных описанной выше, этот механизм сам по себе требует
затрат энергии (АТР) независимо от затрат энергии на трансляцию.
Г. Разобщение транслокации и трансляции в случае более коротких молекул
белков указывает на то, что соответствующий сигнальный пептид может
направить белок через мембрану ЭР в отсутствие одновременно протекающего
белкового синтеза. Почему же в таком случае более длинная молекула белка
не проходит сквозь мембрану в отсутствие трансляции? Одно из возможных
объяснений этого явления может заключаться в том, что сигнальный пептид
становится стерически недоступным для механизма транслокации при сложной
пространственной укладке полипептидной цепи.
Литература: Perara, Е., Rothman, R. Е., Lingappa, V. R. Uncoupling
translocation from translation: implications for transport of proteins
across membranes. Science 232:348-352, 1986.
8-27 Возможное расположение белков в мембране ЭР схематически изображено
на рис. 8-23. Оно согласуется с правилами котранс-ляционного встраивания
белков в мембраны. В каждом случае пептиды "начала переноса"
соответствуют нечетным сегментам, пронизывающим мембрану, а пептиды
"конца переноса" соответствуют четным сегментам белка, пронизывающим
мембрану. Все пептиды "начала переноса" обращены своими N-концами в
сторону цитоплазмы, а С-концами-в просвет ЭР. Все пептиды "конца
переноса" обращены своими N-концами к просвету ЭР, а С-концами-в
цитоплазму. Лидерные пептиды (первые сегменты, пересекающие мембрану)
отщеплены от белков (рис. 8-23, А и Г).
8-28
А. График гидропатии указывает на наличие трех гидрофобных сегментов:
1-25, 75-100 и 185-210 аминокислотные остатки. В соответствии с правилами
Предыдущая << 1 .. 217 218 219 220 221 222 < 223 > 224 225 226 227 228 229 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed