Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
3), был присоединен к последней. Это можно утверждать, поскольку фермент
очищали путем связывания с антителами, специфичными к Р-галактозидазе. То
обстоятельство, что убикитин присоединялся к двум нестабильным ферментам
(но не связывался со стабильным ферментом), свидетельствует в пользу
предположения о том, что убикитин маркирует белок для его последующей
деградации. Лесенка следующих друг за другом полос указывает на то, что к
разным молекулам р-галактозидазы присоединяется (по остаткам лизина)
неодинаковое число молекул убикитина перед тем, как фермент подвергается
деградации.
Литература: Bachmair, A., Finley, D" Varshavsky, A.
In vivo half-life of a protein is a function of its amino-terminal
residue. Science 234:179-186, 1986.
Внутриклеточная сортировка макромолекул 365
8-8
A. Хотя орнитиндекарбоксилаза (ОДКаза) синтезировалась в нормальных и
мутантных клетках с одной и той же скоростью, снижение ее активности в
мутантных клетках происходило в 50 раз медленнее, чем в нормальных.
Поскольку у мутанта этот фермент сохраняет активность значительно дольше,
он может накапливаться в значительных количествах. Активность любого
клеточного фермента зависит от равновесия между скоростью его синтеза
(или активации) и скоростью его деградации (или инактивации). От
соотношения скоростей накопления и потери зависит стационарный уровень
ферментативной активности.
Б. В своих опытах вы измеряли активность ОДКазы, но полученные данные
не позволяют установить, что имеет место: деструкция фермента или
обратимая инактивация. Чтобы разобраться в этом, необходимо определить
количество белка ОДКазы. Уровень белка ОДКазы можно измерить, например,
путем осаждения его специфическими антителами с последующим выделением с
помощью электрофореза и окрашиванием, как описано для ji-галактозидазы в
задаче 8-6. После количественного определения белка ОДКазы оказалось, что
уровень белка и ферментативная активность снижались параллельно друг
другу с одинаковыми скоростями. Эти данные указывают на то, что в
нормальных клетках фермент очень нестабилен.
B. Поскольку периоды полужизни других белков в клетках мутантной линии
остались прежними, то изменение этого параметра должно быть специфично
именно для ОДКазы. Стабильность белка, по-видимому, зависит от вида N-
концевого аминокислотного остатка. Следовательно, изменение периода
полужизни ОДКазы могло произойти из-за того, что в сформированном N-конце
терминальной стала другая аминокислота. (Такое изменение могло и не
обнаружиться при исследовании структуры и ферментативных свойств ОДКазы,
которое вы провели предварительно.) С другой стороны, возможно существует
некая специальная "маркирующая" система, которая в норме метит молекулы
ОДКазы для их деструкции. В этом случае линия мутантных клеток могла, по-
видимому, утратить некоторые компоненты этой "маркирующей" системы.
Литература: Pritchard, М. L., Редд, А. Е., Jefferson, L. S.
Ornithine decarboxylase from hepatoma cells and a variant cell line in
which the enzyme is more stable. J. Biol. Chem. 257, 5892-5899, 1982.
Транспорт молекул белков и РНК в ядро и из ядра
8-9
A. ядерная оболочка
Б. внутренняя ядерная; наружная (внешняя) ядерная
B. ядерные поры; поровый комплекс ядерной оболочки
Г. импорт в ядро
8-10
A. Правильно.
Б. Неправильно. Липидные бислои внутренней и наружной ядерных мембран
на краю каждой ядерной поры переходят один в другой.
B. Правильно.
Г. Неправильно. Для экспорта из ядра, судя по всему, тоже тре-
буются специальные системы узнавания и источники энергии, как и для
импорта в ядро.
Д. Правильно.
8-11
А. Часть молекулы нуклеоплазмина, ответственная за его вхождение в
ядро, должна находиться в хвостовой части молекулы. Действительно,
головки нуклеоплазмина не попадают в ядро при микроинъекции их в
цитоплазму, а это единственный инъецированный фрагмент, не содержащий
хвостовой части молекулы.
Б. Результаты этих опытов позволяют предполагать, что хвостовая часть
молекулы нуклеоплазмина несет сигнал для импорта в ядро и что накопление
в ядре не обусловлено пассивной диффузией. Данные, полученные в тех
вариантах опыта, где были инъецированы целые молекулы нуклеоплазмина или
его фрагменты, содержащие хвостовой пептид, не позволяют сказать, какая
из двух моделей верна; они указывают лишь на то, что хвост является
важной частью молекулы нуклеоплазмина, т. е. что он несет сигнал для
импорта или участок связывания. Решающие наблюдения, свидетельствующие
против механизма пассивной диффузии, относятся к опытам с головками
нуклеоплазмина. То, что они не накапливаются в ядре после инъекции в
цитоплазму, можно было бы объяснить (в случае механизма пассивной
диффузии) отсутствием участка связывания с неким ядерным компонентом.
Если, однако, головка не содержит участка связывания, то она не могла бы
оставаться в ядре и после введения непосредственно в него. Поскольку
