Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уилсон Дж. -> "Молекулярная биология клетки " -> 134

Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.

Уилсон Дж., Хаит Т. Молекулярная биология клетки — М.: Мир, 1994. — 520 c.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyakletki1994.djvu
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 308 >> Следующая

ацетилхолин?
12-5 Радиоиммуноанализ (РИА), отличаясь чувствительностью, точностью и
быстротой, может быть мощным инструментом для количественного определения
практически любого вещества представляющего биологический интерес. Основы
метода были разработаны в процессе изучения диабета у взрослых, когда в
крови больных были обнаружены антитела с высоким сродством к инсулину и
понадобилось разработать приемы, позволяющие отличать свободный инсулин
от инсулина, связанного с антителами.
Как можно использовать антитела с высоким сродством к инсулину и
методы разделения связанного и свободного инсулина для измерения его
низких концентраций? Если небольшое коти чество антисыворотки к инсулину
смешать с таким же неболыш i количеством высокорадиоактивного инсулина,
то часть инсулина
Связанный/свободный
Межклеточная сигнализация 217
Добавленный немеченый инсулин, пг/мл
свяжется, а часть останется свободной в соответствии с равновесием:
Инсулин + Антитело ±5 Комплекс инсулин-антитело [Комплекс инсулин-
антитело]
К. - к
[Инсулин] [Антитело]
При добавлении к этой смеси (где количества радиоактивно
меченного инсулина и антител постоянны) возрастающих количеств немеченого
инсулина отношение связанного радиоактивного инсулина к свободному будет-
в соответствии с уравнением равновесия-уменьшаться (рис. 12-1). Если
концентрации немечен-ного гормона известны, то полученная кривая может
служить в качестве калибровочной при исследовании неизвестных образцов.
У вас есть три пробы, где нужно определить концентрацию
инсулина. После смешивания их с теми же количествами радиоактивного
инсулина и антиинсулиновых антител, которые использовались при получении
калибровочной кривой, приведенной на рис. 12-1, были выявлены следующие
соотношения (связанный инсулин / свободный инсулин):
проба 1 0,67
проба 2 0,31
проба 3 0,46.
A. Какова концентрация инсулина в каждой из этих проб?
Б. На каком участке калибровочной кривой точность определения
наибольшая и почему?
B. Если имеющиеся у вас антитела были выработаны против свиного
инсулина (с человеческим он сходен, но не идентичен ему), будут ли они
пригодны для измерения этим методом концентрации инсулина человека?
12-6 Оптимум чувствительности метода радиоиммуноанализа наблюдается при
равенстве концентраций определяемого вещества и радиоактивного стандарта.
Таким образом, абсолютная чувствительность метода лимитируется удельной
радиоактивностью меченого лиганда. Чем выше удельная радиоактивность
лиганда, тем меньше его можно добавлять в каждую пробу и, следовательно,
тем меньшее количество вещества в анализируемом образце можно определить.
Вы хотите измерить концентрацию инсулина (молекулярна масса 11
466) в образце, пользуясь инсулином, меченным радиоа тивным йодом (период
полураспада 7 сут). Предположим, чт мечение производится из расчета один
атом радиоактивного йод на молекулу инсулина, что йод не влияет на
связывание инсулин антителами, что эффективность счета (вероятность
зарегистриро вать каждый радиоактивный распад как "импульс") составляе
50%, а минимальное общее количество радиоактивности (связав ная +
свободная) для данного метода должно быть не менее 1 ОН импульсов в
минуту (имп/мин).
А. Исходя из этого рассчитайте, сколько радиоактивного инсулина (i
пикограммах) потребуется для одного определения.
Б. Сколько пикограммов немеченого инсулина можно будет обнару жить при
оптимальной чувствительности?
12-7 Тиреоидный гормон тироксин состоит из двух соединенных дру с другом
йодированных остатков тирозина (рис. 12-2). В щитовад ной железе он
накапливается в специальных структурах, называе мых фолликулами, причем в
виде составной части гораздо бол" крупного белка тиреоглобулина. Фолликул
представляет соба внеклеточную полость (просвет фолликула), окруженную
клеткам эпителия. При действии на щитовидную железу тиреотропноп гормона
(ТТГ) тироксин отщепляется с помощью протеаз о тиреоглобулина и
высвобождается в кровоток.
Проследить в деталях цепь событий, конечное звено которой выброс
тироксина в кровь, оказалось совсем непросто. Когд щитовидная железа
стимулируется ТТГ, в цитоплазме фоллш; l лярных клеток появляются капли
коллоида. Сходство веществ f этих капель с веществом в просвете фолликула
породило ингев сивные споры о том, что представляют собой эти капли:
веществ! поставляемое фолликулярной клеткой в просвет (для пополнеш
запаса), или, наоборот, вещество из просвета фолликула, погло щенное
клеткой (для образования тироксина)? Вопрос был разре шен с помощью серии
экспериментальных наблюдений.
1. Если пометить коллоид в просвете фолликула радиоактивны! йодом,
131J, а затем стимулировать фолликулы посредство! ТТГ в условиях,
предотвращающих дальнейшее включеш метки, радиоактивность появляется во
внутриклеточных кап лях.
2. Эти капли образуются спустя примерно 4 мин после добавлеш ТТГ и
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 308 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed