Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
озна
в т.
жеш
и тр
ребе
Рве.
для
несу:
Рис.
ных
геноа
гибр]
ченш
Числ
обра!
R-E
К-К
ДНК
Контроль генной экспрессии 187
А. Карта рестрикции
А В С
+ +1- +/- +/- +
Н-2Ч--------------4-------h-
т.п.н.
Рнс. 10-20. Рестрикционная карта (А) для области хромосомы, несущей ген,
который вызывает заболевание, и результаты рестрикции ДНК (Б) от разных
членов семьи (задача 10-31). Полиморфные сайты обозначены А, В и С. Числа
означают размеры фрагментов в т. п. н. Кружками обозначены женщины,
квадратами-мужчины и треугольником-неродившийся ребенок.
Б. ГЕНЕАЛОГИЯ
Материнская Отцовская
Рис. 10-21. Рестрикционная карта для клона бактериофага лямбда, несущего
два гена U2 (задача 10-32).
Левое плечо молекулы ДНК фага X Kpnl
I-----1------L-
Hindlll
Hindi -о I ¦ t
Ген U2
Hindi 11
Kpnl
- L -
Правое плечо молекулы ДНК Hincll фагаХ
и дедушек, а также здорового ребенка и проводите картирование с
помощью рестриктаз, как показано на рис. 10-20, Б. Теперь вы готовы
проанализировать ДНК плода. Какие полосы рестриктов укажут, что плод,
вероятно, унаследовал болезнь?
10-32 Вас интересуют гены человека, кодирующие малые ядерные U2-PHK (Ш-
мяРНК); они содержатся в ядре в количестве тысяч копий и играют важную
роль в процессинге мРНК. С использованием радиоактивно меченной 112-мяРНК
вы выделили клон бактериофага лямбда, несущий две копии гена U2,
расположенные на расстоянии 6 т.п.н. друг от друга. Рестрикционная карта
ДНК этого клона представлена на рис. 10-21. Когда вы полностью
рестрицируете геномную ДНК человека ферментами Hindlll, Hincll (Н2) или
Kpnl (К) и анализируете фрагменты, получившиеся в результате рестрикции,
методом блот-гибриди-
Hindlll
10 20 30 45 60 90 Н2 К К(Х.)
! Рис. 10-22. Радиоавтограф различ-ных рестрикционных фрагментов геномной
ДНК человека после их гибридизации с радиоактивно меченным геном U2
(задача 10-32). Числа под Hindlll означают время 'бработки в минутах. В-
BglH,
1-EcoRI, X-Xbal, Н2- Hincll,
К - Kpnl, К.(>.) - клонированная ДНК. обработанная Kpnl.
t Глава 10
Рис. 10-23. Рестрикционные карты генов зрительных пигментов A-типа и В-
типа (задача 10-33). Экзоны обозначены маленькими светлыми
прямоугольниками. Участки ПДРФ, выявленные при обработке Rsal, обозначены
под генами. Е-EcoRI, В-BamHI, H-HindIII, S - Sail.
зации с геном U2, то обнаруживаете единственную интенсивную
полосу, содержащую фрагменты размером 6 т. п. н. (рис. 10-22, дорожки с
9-й по 11-ю). Если вы разрезаете геномную ДНК рестриктазами Bglll (В),
EcoRI (R) или Xbal (X), которые не расщепляют последовательности
клонированных генов (рис. 10-21), то также обнаруживаете единственную
интенсивную полосу, однако размеры содержащихся в ней фрагментов превы- ;
шают 50 т.п.н. (рис. 10-22, дорожки с 1-й по 3-ю). Если проин-кубировать
геномную ДНК с Hindlll, отбирая аликвоты в разные промежутки времени, то
вы увидите лесенку полос (дорожки с 4 по 9). Если 2 нг клонированной ДНК
разрезать Kpnl и после этого нанести на гель параллельно 10 мкг геномной
ДНК, обработанной Kpnl, то будут видны две полосы, интенсивность которых
равна интенсивности полосы фрагмента размером
6 т. п. н., полученного при обработке всей геномной ДНК
рестриктазами (сравните дорожки 11 и 12).
A. Объясните, как путем изучения смеси рестрикционных фрагментов
можно определить строение генов U2 в геноме человека.
Б. Почему в случае обработанной рестриктазами клонированной ДНК
(дорожка 12) при электрофорезе видны две полосы, тогда как в случае
обработанной рестриктазами геномной ДНК наблюдается только одна полоса
