Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
сыворотки) и ее количество t увеличивается соответствующим образом после
введения сьщ ротки. Можете ли вы объяснить это на основании стабильной
мРНК? !
кДНК из печени
М I Q F D ATGATACAATTTGAT
мРНК аро-В
кДНК ATGATATAATTTGAT
из кишечника М I *
Рис. 10-19. Локализация различий в последовательностях клонов кДНК-копий
матричных РНК аро-В, выделенных из печени и кишечника (задача 10-28).
Закодированные в последовательности аминокислоты указаны над
последовательностью кДНК или под ней.
10-28 В составе липопротеинов плазмы крови присутствуют две
близкородственные формы аполипопротеина В (аро-В). У человек^ в печени
синтезируется аро-В 100, который необходим для сборк( липопротеинов с
очень низкой плотностью (VLDL-very lot; density lipoproteins) и для
транспорта эндогенно синтезируемы' триглицеридов. Аро-В48 синтезируется в
кишечнике; он необхр дим для образования желудочного сока, а также для
всасываний и переноса холестерола и триглицеридов из пищи. Ряд данны|
указывает на то, что аро-В48 представляет собой аминоконцевуй половину
аро-В 100. Какова же взаимосвязь между этими двум| белками? Являются они
продуктами разных генов или коде руются одним и тем же геном, образуясь
при этом в ход# тканеспецифического процессинга РНК или
тканеспецифическоп расщепления белка?
С помощью методов генной инженерии были проклониро ваны кДНК-
копии матричной РНК из клеток печени и кише" ника человека. При изучении
нескольких клонов для каждой вида ткани обнаружилось всего лишь одно
отличие: кДНК к клеток кишечника содержала Т в составе стоп-кодона в та
месте, где у кДНК из клеток печени присутствовал С в состав; кодона
глутамина (рис. 10-19). Чтобы более подробно изучил это различие в мРНК,
а также соответствующие ему различи в геноме, область, содержащую
изменения, амплифицировал используя метод PCR (polymerase chain reaction
- полимеразна цепная реакция). Из клеток кишечника и печени выделяли РНЕ
и ДНК, а затем подвергали их PCR-амплификации, использу] олигонуклеотиды,
комплементарные крайним (фланкирующим) участкам изучаемой области. Затем
в полученных амплифициро' ванных фрагментах ДНК каждого из четырех
препаратов непосредственно определяли изменения, гибридизуя эти фрагмег
ты с олигонуклеотидами, содержащими либо последователь' ности кДНК из
печени (олиго-Q), либо последовательносп кДНК из кишечника (олиго-STOP).
Результаты приведены табл. 10-5.
Контроль генной экспрессии 185
Таблица 10-5. Гибридизация специфических олигонуклеотидов с амплифициро-
ванными сегментами РНК и ДНК из печени и кишечника (задача 10-28)
РНК ДНК
Печень Кишечник Печень
Кишечник
Олиго-Q + - + +
Олиго-STOP - + - -
Олиго-Q - олигонуклеотид, комплементарный последовательности кДНК
печени, олиго-STOP- олигонуклеотид, комплементарный последовательности
кДНК кишечника. Гибридизация проводилась в очень жестких условиях, так
что если не спаривался даже один нуклеотид, гибридизации не происходило.
Каким образом эти результаты позволяют выявить механизм
тканеспецифического синтеза аро-ВЮО в клетках печени и аро-В48 в клетках
кишечника? Как образуются эти две формы аро-В: в результате контроля на
уровне транскрипции двух разных генов, в результате контроля на уровне
процессинга транскриптов РНК с одного гена или путем дифференциального
расщепления белкового продукта, кодируемого одним и тем же геном?
Организация и эволюция ядерного генома
(МБК 10.5)
10-29 Заполните пропуски в следующих утверждениях.
A. Тандемные повторы простой последовательности называют
___________, поскольку впервые обнаруженные ДНК такого типа
имели необычное соотношение нуклеотидов, что позволило выделить их
из суммарной клеточной ДНК как минорные компоненты.
Б. Некоторые_____________ перемещаются в хромосомах с места на
место в виде ДНК, тогда как многие другие перемещаются в форме
промежуточной РНК.
B. Почти одновременное перемещение транспозонов нескольких
типов, которое называется____________, может приводить к ка-
тастрофическим изменениям в геноме.
Г. Две перемещаемые последовательности ДНК, образно говоря, наводнили
геном человека: более длинный________________, составляющий около 4%
нашей ДНК, и более короткая____________,
составляющая около 5% нашей ДНК.
10-30 Укажите, какие из следующих утверждений правильные, а какие -нет.
Если утверждение неверно, объясните почему.
__ А. У любого конкретного вида функции большинства генов, вероятно, уже
оптимизированы в отношении изменчивости, вызываемой точковыми мутациями.
__ Б. Тандемно повторяющиеся функциональные гены в основном
остаются неизменными благодаря неравному кроссинговеру и конверсии
