Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
вычислена для данного производного и равна 0,001 части молекулярной массы
всех атомов остатка, который добавляется в производном к исходной
харбамильной баковой цепи. Таким образом, для аминоэтильного производного
Дг=0,043. Этим методом нельзя определять аминогруппы, если в качестве
пространственной группа используется диаиилгидразид:
-СО-NHNH-COR'**-СО-NBN<->COR'+.H<+\ рК"" 11,0.
Кориблат и др. [42] определили количество гексаметилендиамииа, связанного
с сефарозой, титрованием геля по тимолфталеику 0,1 М едким натром.
9.2.2. Определение свободных карбоксильных групп [28]
325 мг хлоргидрата этилового эфира глицина растворяют в 2,5 мл диметил-
сульфоксида и добавляют эквивалентное количество триэтиламина для
переведения эфира в свободное основание. Реакционную смесь, охлаждаемую
во льду, перемешивают 1 ч, затем фильтруют для удаления осадка хлорида
триэтилам-мония. Раствор добавляют к 50 мг карбоксильного производного
геля. К пере-мешнваемой иа магнитной мешалке суспензии геля добавляют
раствор 325 мг дициклогексилкарбодиимида в 3 мл диметилсульфоксида и
реакцию оставляют при комнатной температуре на 16 ч. Гель отделяют
центрифугированием, ресус-пеиднруют в 5 мл диметилсульфоксида и снова
центрифугируют. Промывание диметилсульфоксидом повторяют три раза, а
затем трижды промывают ацетоном. После высушивания в течение 24 ч над
пятиокисью фосфора в вакууме проводят кислотный гидролиз 6 М соляной
кислотой в течение 48 ч при 110°С; количество глицииа в геле определяют
иа аминокислотном анализаторе.
9.2.3. Определение свободных аминогрупп в полимерах путем конденсации с
2-окси-1-нафтальдегидом [18]
При конденсации 2-окси-1-нафтальдегида со свободными аминогруппами в
полимере образуется стабильный альдимин (шнф-фово основание). После
переноса хромофорной группы с полимера на амин, например бензиламин,
определяют содержание образующегося растворимого альдимина. Эско и др.
[18] рекомендуют следующую методику.
К 10 мг полимера в абсолютном спирте добавляют с большим (50--100-
кратным) избытком 2-окси-1-иафтальдегид и оставляют при комнатной
температуре на 12 ч. После тщательной промывки полимера дихлорметаном
добавляют 2 мл 0,4 М бензиламииа в дихлорметане и смесь вновь оставляют
на 30 мин. Содержание 2-окси-1-кафтилиденбензиламнна определяют
спектрофотометрически при 420 нм. Избыток бензиламииа не мешает
определению.
9.2.4. Определение азидных групп [10]
Свежеприготовленные азидные производные промывают 2-3 раза ледяной водой
для удаления кислоты, затем 5-10 мл промытого геля суспендируют л 20 мл
0,1 М едкого натра и 2 ч перемешивают при комнатной температуре. 0,1 мл
прозрачного супернатанта добавляют к 4,9 мл 0,1 М раствора аммониевых
квасцов. Измеряют оптическую плотность при 458,1 нм относительно
контрольного образца (4,9 мл 0,1 М раствора железоаммониевых квасаов+0,1
мл
240
Глава 9
0,1 М едкого натра); измерения следует выполнять в течение первых S мин,
потому что в кислой среде медленно освобождается азотистоводородная
кислота. При концентрации азида 0,01-*1,4 ммоль/л применим закон Бера
(84*8,1 = *=1,2-10е л-моль-1-см-'). Концентрация азидов в супернатанте (в
миллиэквивалентах на литр) может быть рассчитана но уравнению
^3^=ssTTF,'oX'
Концентрация азида в образце сухого полимера (в мнллнэквивалеитах на
грамм) равна
[N3"]C=[N -, (9.2)
где Ь - общее содержание воды в суспензии в литрах, а с - масса сухого
образца полимера в граммах.
9.2.5. Цветная реакция с 2,4,6-тринитробензолсульфонатом натрия
Инман и Динтзис (38] описали простую качественную цветную реакцию, с
помощью которой можно следить за процессом замещения в геле.
К 0,2-0,5 мл модифицированного геля (в дистиллированной воде) в ~ 1 мл
Насыщенного раствора буры прибавляют 3 капли 3%-иого раствора 2,4,6-три-
иигробензолсульфоната (ТНБС):
, , ТНБС
NH(CHj)eNHj рн>9>
Оставляют раствор на 2 ч при комнатной температуре (для развития
окраски). В табл. 9.1 указаны цвета, получающиеся при исследовании
некоторых производных геля. Увеличение замещения аминопроиэводных
карбоксильными лигандами или гидразидных производных аффинными лигандами,
которые содержат аминогруппы, может быть определено по относительной
интенсивности окраски геля. Количественные результаты можно получить,
если отмыть гель от пнкри-
Таблица 9.1
Окраска, образующаяся в результате реакции геля с 2,4,6-три нитробензол
сульфонатом натрия
Производное геля Цвет
Незамещенная агароза или полиакриламид Палево-желтаи
Карбоксильное н бромацетилыюе Желтая
Первичные алифатические амины Оранжевая
Первичные ароматические амины Красно-оранжевая
Незамещенные гидразиды Темно-красная
Характеристика носителей и иммобилизованных лигандов__________241
новой кислоты и иепрореагировавшего ГНБС, а затем солюбилизировать его
нагреванием в 50%-иой уксусной кислоте. Содержание аминогрупп в геле
определяют, измеряя оптическую плотность при 340 нм.
9.2.6, Флуорескаминовый метод быстрого определения следовых количеств
