Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Туркова Я. -> "Аффинная хроматография" -> 7

Аффинная хроматография - Туркова Я.

Туркова Я. Аффинная хроматография — М.: Мир, 1980. — 472 c.
Скачать (прямая ссылка): afinnayahromatografiya 1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 < 7 > 8 9 10 11 12 13 .. 198 >> Следующая

свиньи.
вали ряд лактатдегидрогеназ из различных источников, константы которых
известны. Рис. 2.3 иллюстрирует прямую пропорциональность Адисе от
элюирующей концентрации NADH. Линейность указывает. что в данном случае
константы диссоциации комплексов фермент - NADH играют более важную роль,
чем константы диссоциации комплексов фермента с иммобилизованным аффинным
лигандом (АМР). Таким образом, появилась возможность определения констант
диссоциации двойных комплексов фермента с NADH; метод основан на
установлении элюирующих концентраций NADH. Не обнаружено различий в
величинах Ка"сс при использовании как кристаллических, так и неочищенных
препаратов ферментов. Другие белки, присутствующие в неочищенных
препаратах, даже если они связывались колонкой, не влияли на картину
элюирования. Это обстоятельство создает огромное преимущество таких
определений по сравнению с обычными методами определения констант
диссоциации, которые требуют не
Принцип метода, историческая справка и применение
19
только чистых ферментов, но также и гомогенных изоферментов. Другим
преимуществом является большая быстрота и расход очень небольших
количеств фермента для каждого определения.
Использование аффинной хроматографии для определения, например, констант
ингибирования ферментов, по-видимому, весьма перспективно. Данные об
объемах элюатов, содержащих фермент, на колонке с иммобилизованным
ингибитором, полученные при использовании различных концентраций
ингибитора в растворе, позволяют определить константы ингибирования как
для связанного ингибитора, так и для ингибитора в растворе. Метод
детально рассмотрен в гл. 4. Большое преимущество этого метода состоит в
том, что при использовании одного и того же ингибитора как для
иммобилизации, так и для элюирования можно непосредственно сделать выводы
о влиянии связей с носителем и природы носителя на изучаемое
взаимодействие на основании совпадения или различий в определяемых
величинах констант диссоциации. Следовательно, метод аффинной
хроматографии открывает новые возможности не только для изучения
взаимодействия биологически активных веществ, он перспективен также и для
выяснения влияния микроокружения на образование этих комплексов.
список ЛИТЕРАТУРЫ
1. Akanutna II., Kasuga A., Akanuma Т., Yamasaki М., Biochem. Biophys.
Res. Comm., 45. 27-33 (1971).
2. Axen R" Emback S., Eur. J. Biochem., 18, 351-360 (1971).
3. Axen R" Porath J.. Ernback S., Nature (London), 214, 1302-1304 (1967).
4. Brodetius P., Mosbach K., FEBS Lett., 35, 223-226 (1973).
5. Brodetius P., Mosbach K-, Biochem. Soc. Trans., 2, 1308-1310 (1974).
6. Campbell D. H., Ltiescker E. L., Lerman L. S., Proc. Nat. Acad. Sci.
U.S., 37, 575-578 (1951).
7. Cuatrecasas P., Anfinsen С. B" Methods Enzymol., 22, 345-378 (1971).
8. Cuatrecasas P., Wilchek М., Anfinsen C. B.t Proc. Nat. Acad. Sci.
U.S., 61, G36-643 (1968).
9. Delaney M" O'Carra P., Biochem. Soc. Trans., 2, 1311 (1974).
10. Denburg J., De Luca М., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S., 67, 1057-1062
(1970).
11. Edmonds М., Vaughan М. H., Hakazato H" Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.,
68, 1336-1340 (1971).
12. Gawronski Т. H., Wold P., Biochemistry, 11, 442-448 (1972).
13. Jankowski W. Davey M. W., O'Malley J. A., Sulkowski E., Carter W. A.,
Л. Virol., 16, 1124-1130 (1975).
14. Kasche V., Arch. Biochem. Biophys., 173, 269-272 (1976).
15. Lerman L. S., Proc. Nat. Acad. Sci. U. S., 39, 232-236 (1953).
16. Lowe C. R" Dean P. D. F" FEBS Lett,, 18, 31-34 (1971).
17. O'Carra P., Barry S., Griffin Т., Methods Enzymol., 34, 108-126
(1974).
18. Porath I., Axen R., Ernback S., Nature (London), 215, 1491-1492
(1967).
19. Reiner R. H., Walch A,, Chromatographia, 4, 578-587 (1971).
20. Schott H., Eckstein H., Gatfield /., Bayer E" Biochemistry, 14, 5541-
5548 (1975).
21. Starkenstein E., Biochem. Z" 24, 210-218 (1910).
22. yogi Y" Engel K-. Pressman D., J. Immunol., 85, 375-386 (1960).
2*
Глава 3
Теория аффинной хроматографии
3.1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ, ВЫВЕДЕННЫЕ ИЗ РАССМОТРЕНИЯ РАВНОВЕСНОЙ
МОДЕЛИ*
Несмотря на значительное число статей [6, 8, 10, 12-14], в которых
эмпирически трактуется большинство варьирующих факторов, влияющих на
результаты аффинной хроматографии, теоретические рекомендации, основанные
на физико-химических свойствах и закономерностях, очень редки. Наиболее
конструктивна разработка Грейвсом и By [3] простых кинетических и
равновесных моделей аффинной сорбции и десорбции. Анализировалась в
отдельности адсорбционная и десорбционная фазы аффинной хроматографии, но
в каждой фазе рассматривались в первую очередь ограничения, основанные па
равновесных закономерностях, и не принимались во внимание кинетические
процессы (диффузия и реакция).
Поскольку существенно легче анализировать результаты сорбции или
десорбции в одноразовом процессе, основные закономерности выведены для
простой модели, включающей одноразовую сорбцию, промывку и элюирование, в
предположении, что равновесие достигается на каждой стадии. При этом в
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 < 7 > 8 9 10 11 12 13 .. 198 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed