Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Туркова Я. -> "Аффинная хроматография" -> 54

Аффинная хроматография - Туркова Я.

Туркова Я. Аффинная хроматография — М.: Мир, 1980. — 472 c.
Скачать (прямая ссылка): afinnayahromatografiya 1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 198 >> Следующая

клеток, субклеточных частиц и растворимых углеводсодержащих молекул.
Лекгин привязан к микрогранулам (диаметр 200-300 мкм) сефарозы 6МВ бром-
циановым методом. Набухший гель содержит - 5 мг связанного лектина в 1 мл
и его адсорбционная емкость по овомукоиду (молекулярная масса 28 000)
составляет ~1 мг на 1 мл объема колонки. Он поставляется в виде суспензии
по 10 мл седиментиро-ванного геля в 0,9%-ном растворе хлорида натрия,
содержащем 0,01% мертиолата в качестве консерванта, Фирма рекомендует
хранить гель в холодильнике при 3-8°С. Для предотвращения диссоциации
лектина на субъединицы гель не следует использовать в средах с рН<3,5.
Для аффинной хроматографии антител типа иммуноглобулина G,
иммуноглобулиновых молекул подклассов 1, 2 и 4 и их Fe-фрагментов
поставляется носитель белок А-сефароза CL-4B. Белок А-белок клеточных
стенок Staphylococcus aureus - состоит из одной полипептидной цепи
(молекулярная масса 42 000). Характерным биологическим свойством белка А
является его способность взаимодействовать с молекулами различных
иммуноглобулинов G из разных видов животных. Белок ковалентно Связан с
сефарозой CL-4B с помощью бромцианового метода. Содержание белка 2 мг/мл
и связывающая емкость для иммуноглобулина G человека - 25 мг
иммуноглобулина в 1 мл геля. Если в качестве носителя используется
сефароза CL-4B (т. е. агароза, сшитая 2,3-ди'бромпропанолом и
десульфированная щелочным гидролизом в восстановительных условиях),
сорбент - белок А - сефароза CL-4В - характеризуется высокой химической и
механической стабильностью. Сорбент устойчив в области pH 2-11 и может
выдерживать относительно высокие концентрации денатурирующих агентов,
таких, как мочевина и гуанидинхлорид, а также не изменяется в присутствии
хаотропных солей, таких, как 3 М роданид калия, который обычно
используется для элюирования связанных молекул с иммуносорбента. Гель
поставляется в лиофиль-но высушенном виде, >в него добавляются декстран и
лактоза.
1 г лиофилизованного порошка эквивалентен -3,5 мл набухшего геля. При
хранении в холодильнике при 8°С этот иммуносорбент сохраняет свою емкость
по иммуноглобулину по крайней мере в течение двух лет.
Среди других иммобилизованных аффинных лигандов, производимых фирмой
Pharmacia следует упомянуть Б'-АМР - сефаро-
Выбор аффинных лигандов
зу 4В, которую получают связыванием N6- (6-аминогексил) -5'-АМР на
сефарозе 4В бромциановым методом. Этот сорбент дает возможность проводить
группоспецифическое разделение ферментов, связывающих кофакторы с общей
аденилатной частью в виде 5'-АМР. К таким ферментам относятся
дегидрогеназы с кофактором NADH, а также некоторые киназы с кофактором
АТР. Концентрация связанного 5'-АМР составляет ~2 мкмоля в 1 мл
¦набухшего геля. Для кристаллической лактатдегидрогеназы связывающая
емкость равна -10 мг фермента на 1 мл набухшего геля в 0,1 М фосфатном
буферном растворе (pH 7) при 20 °С. Гель поставляется в виде лиофильно
высушенного порошка в пакетах по 5 г, что эквивалентно 20 мл набухшего
геля. Порошок содержит добавки для сохранения способности геля к
набуханию.
Для хроматографии рибосомальной РНК и для выделения плазминогена
производится лизин - сефароза 4В путем связывания п-лизина с сефарозой 4В
после активации бромцианом. Концентрация связанного лизина составляет 4-5
мкмоль на 1 мл набухшего геля. Лизин-сефароза 4В поставляется в виде лио-
филизованного порошка в пакетах по 15 г, что эквивалентно 60 мл набухшего
геля. Порошок содержит добавки для сохранения способности геля к
набуханию. При хранении сухого геля при температурах <8"С не наблюдается
никакой заметной потери связанного лиганда даже через 1 год хранения.
Другим иммобилизованным аффинным лигандом является поли (U)-сефароза 4В,
которая получена путем стабильной ковалентной привязки полиуридиновой
кислоты [поли(и)] к сефарозе 4В после активации бромцианом. Этот метод
связывания приводит к многоточечному ковалентному связыванию через
тауто.чер-ные енолатные ионы нуклеотида и к не менее предпочтительной
одноточечной этерификации свободной концевой фосфатной группы. Цепь из
30-40 нуклеотидов позволяет одновременно осуществлять многоточечное
связывание с матрицей и связывание с полиадениловой частью информационной
РНК- Благодаря своей длнне эта цепь действует одновременно как
пространственная группа и таким образом обеспечивает хорошую
пространственную доступность при образовании комплекса. Количество
связанной уридиловой кислоты составляет ~0,5 мг на 1 мл набухшего геля.
Связывающая емкость равна - 150 мкг информационной РНК на 1 мл набухшего
геля, что эквивалентно ~5 оптич, ед. (при использовании полисомальных
препаратов из клеток КВ - линии гетероплоидных клеток человеческого
происхождения). Выходы информационной РНК составляют ~90%. Поли(и)-
сефароза 4В поставляется в виде лиофилизованного порошка в пакетах по 5
г, соответствующих 25 мл набухшего геля. Для сохранения способности геля
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 198 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed