Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
другие хроматографические материалы. Точно так же как сегодня в очень
редких лабораториях готовят ДЭАЭ- и КМ-целлюлозу, совершенно закономерно,
что будет постепенно увеличиваться использование продажных био-
специфических сорбентов. Это справедливо прежде всего для сорбентов с
групповой специфичностью или сорбентов специфических к веществам,
постоянно получаемым в лабораториях, и обусловлено специфической природой
аффинной хроматографии. Из разнообразия биологически активных веществ
следует, что необходим очень широкий ассортимент специфических сорбентов;
поэтому много научных работников, по-видимому, будут вынуждены сами
готовить специальные высокоэффективные сорбенты.
Иммобилизованные аффинные лиганды поставляют преимущественно следующие
фирмы*: Miles Labs (Англия), Miles-Yeda (США), Pharmacia (Швеция), PL
Biochemicals (США), Koch-
* В тексте упомянуты только фирмы, известные автору: поэтому предлагаемый
перечень, конечно, неполный и его никоим образом нельзя рассматривать как
рекомендацию для использования каких-либо определенных продуктов,
выпускаемых конкретными фирмами.
138
Глава 6
Таблица 6.4
Нерастворимые ферменты, производимые фирмами Miles-Seravac и Mlles-Yeda
Фермент
Ферменты, связанные с КМ-целлюлоэой(1) или
ДЭА^целлЮЛОЗОЙ( 11)
Содержание бел ка,
%
Ферменты, связанные с сополимером этилена и маленнового ангидрида (ЭМД)
Содер-
жание
белка,
Ферменты* связанные с агарозой
Трипсин
Химотрипсин
Папаин
Протеаза (Streptomyces griseus ) Субти.юпепти-даза
Лейцинамнно-
пелтидаэа
Бромелаин
Фицин Алкогольде-гидрогеназа Г лкжозоокси-даза Пероксидаза
Рнбоиуклеаза
Уреаза Амилаза Цитохром с
Энзайт-трипсин (I)
Энзайт-химотрип-син(1)
Энзайт-папаин(1) Энзайт-протеаза (1)
Энзайт-лейцинами-нопептидаза(П) Энзайт-бромела* ин(1)
Энзайт-фицин(1) Энзайт-YADHa (II)
Энзайт-глюкозо-оксидаза(П) Энзайт-пероксида-за(1)
Энзайт- РНКаза (I) Энзайт-уреаза (II) Энзайт-ам илаза (I) Энзайт-цитохром
(I)
5-10
5-10
5-10
1-10
5-10
5-10
5-10
1-5
5-10
1-10
5-10
5-10
5-10
5-10
Энзайт-ЭМА-трипсин
Энзайт-ЭМ А-
химотрипсин
Энзайт-ЭМА- папаин
Энзайт-ЭМА- еубтилопеп-тидаза А Энзайт-ЭМА-
субтилопеп-
тидаза В
65-
65-
60-
50
50
¦70
70
¦65
1-55
-55
Энзайт- агароза-¦ трипсин Энзайт- агароза- химотрипсин Энзайт- агароза-
папаин Энзайт- агароза- протеаза
а YADH - дрожжевая алкогольдегвдрогеназа.
Light Labs. (Англия), Merck (ФРГ) и Collaborative Research (США).
В табл. 6.4 перечислены иммобилизованные ферменты, производство которых
было начато до 1970 г. фирмами Miles-Seravac н Miles-Yeda. Эти фирмы
производят следующие аффинные лиганды для выделения ряда биологических
макромолекул;
Выбор аффинных лигандов
139
Сорбент
Выделяемый фермент Емкость сорбента, мг/мл
Агароза-е-аминокапронил- Химотрипсин
D-триптофан- метиловый эфир
Агароза-Gly-Gly-Tyr(OBz)- Папайи
Arg-
Агароза - казеин (15-20 мг/мл Протеинкиназа казенна)
Агароза--5'-(4-аминофе- Рибоиуклеаза
нил) фосфорилуридин-2' (3') -фосфат
Агароза-ингибитор трипсина Трипсин и химотрипсин
Агароза-л-аминофенилмер-кури (11) ацетат
Меркаптопапаин и другие меркаптосоедиие-ния
2,5
3.7
4.7
10-14 мкмоль/мл 1-2
Для выделения специфически связывающихся белков производятся следующие
препараты:
Сорбент
Агароза-е-аминокапронилфукозамии Агароза- L -фенилаланин Агароза-тироксин
Агароза-трииодтиронин
Агароза-L-триптофан Агароза-L-триптофан Агароза-L-тирозин
Содержание аффинного лиганда
2,4 мг/мл 1-2 мг/мл 1,3 мг/мл
10-14 мкмоль/мл 3-4 мкмоль/мл 3-8 мкмоль/моль
Для выделения сывороточных белков производятся следующие препараты:
Соответствующий сывороточный белок
Плазминоген Бычий сывороточный альбумин Иммуноглобулин G человека
Сорбент
Агароза-L-лизин Агароза-анти-БСА
Емкость сорбента, мг/мл
6,8 оптич. ед./мл 0,6
Агароза-анти-IgG (человека )-агароза
Для очистки иммуноглобулина фирма Miles производит динитрофенил-агарозу
(емкость 2 мг/мл) и арсанилат-агарозу (емкость 5 мг/мл). Для очистки
углеводов и гликопротеина производится СБА - агароза (агароза со
связанным агглютинином соевых бобов). Производится также иммобилизованный
белок, связывающий фукозу,- фукозил^кс, иммобилизованный агглютинином
зерен пшеницы - гликаминозилекс, иммобилизованный кон-канавалин А -
гликозилекс. Все перечисленные сорбенты готовились путем связывания с
агарозой,
Агароза со связанным конканавалином А производится также фирмой Pharmacia
как кон А - сефароза. Конканавалин А связан с сефарозой 4В бромциановым
методом, и его содержание составляет ~8 мг в 1 мл набухшего геля. Кон А -
сефароза поставля-
140
Глава 6
ется в виде суспензии в 0,1 М ацетатном буферном растворе (pH 6),
содержащем 1 моль/л хлорида натрия, по 1 моль/л хлоридов кальция, магния
и марганца и 0,02% мертиолата в качестве консерванта. Гель следует
хранить в холодильнике при 3-8"С.
Еще один иммобилизованный лектин поставляется фирмой Pharmacia - лектин
из зерен пшеницы-сефароза 6МВ, который используется для фракционирования
