Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Туркова Я. -> "Аффинная хроматография" -> 51

Аффинная хроматография - Туркова Я.

Туркова Я. Аффинная хроматография — М.: Мир, 1980. — 472 c.
Скачать (прямая ссылка): afinnayahromatografiya 1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 45 46 47 48 49 50 < 51 > 52 53 54 55 56 57 .. 198 >> Следующая

кислота3, Лцо ыа 100 мг целлюлозы
Олигодезокситимндилат-цел- 3,56 0,90 0,33
люлоза (CF-11)
Олигодезоксицит идил а т-цел- 0,60 1,32 0,36
люлоза (CF-11)
Обработанная целлюлоза 0,48 1,06 0,21
(CF-11)
Необработанная целлюлоза 0,54 1,05 0,22
(CF-11)
Необработанная целлюлоза 1,26 1,33 0,37
(СС-41)
Необработанная целлюлоза 1,98 1,83 0,28
(снгмацелл-38>
а Нанесено 4,52 А;и на каждую колонку. (r) Нанесено 2,40 -4на каждую
колонку. (r) Нанесено 4,12 на каждую колонку.
гированием в градиенте сахарозы обнаружен очень хороший эффект
разделения. Де Ларко и Гуров [11] испытали ряд целлюлоз, сравнивая
способности их производных связывать олигомеры гомонуклеотидов. Из табл,
6.3 следует, что целлюлозы проявляют значительную сорбционную
способность, степень которой различна для разных целлюлоз. Поскольку
обработка целлюлозы бисульфитом натрия приводит к уменьшению количества
сорбируемой полиадениловой кислоты, сделан вывод, что связывание
обусловлено лнгниноподобными примесями. Специфичность продажной
олигодезокситимндилат - целлюлозы ТЗ к молекулам, содержащим
полиадениловую кислоту, обсуждается в разд. 6.11 (табл. 6.6).
Линдберг и Персои [33] и Ветекам и сотр. [60] использовали сефарозу с
ковалентно связанной полиуридиловой кислотой для выделения РНК из полисом
клеток животных. Для очистки ДНК Эдельман [15] также применил аффинный
сорбент, приготовленный из сефарозы, однако аффинный не к ДНК, а
модифицированный пектинами, подходящими для примесей полисахаридов,
которые могут быть с большим трудом удалены из ДНК. Наиболее часто
используется конканавалнн А-еефароза, поскольку наиболее общими
полисахаридными примесями являются фракции гликогена или крахмалоподобные
вещества. Если присутствуют полисахариды, которые кроме глюкозы, фруктозы
или маннозьг
Выбор аффинных лигандов
133
содержат другие концевые группы, то следует использовать также и другие
иммобилизованные лектины.
В разд. 4.4 была рассмотрена матричная хроматография [51], применяемая
для исследования взаимодействий между пептидами я олигодезокситимидиловой
кислотой. Шотт и др. [50] применили также иммобилизованные
олигонуклеотиды для избирательного разделения свободных нуклеотидов по
механизму образования пар оснований. Комплементарные олигонуклеотиды в
подвижной фазе избирательно сорбируются на иммобилизованной матрице, если
хроматографию проводить в условиях, необходимых для образования дар
оснований. Десорбция осуществляется с помощью градиента температуры.
Матричная хроматография позволяет изучать специфичность олигонуклеотидов
в образовании нуклеотидных пар и взаимодействие олигонуклеотидов с
пептидами.
Для хроматографии мононуклеотидов, олигонуклеотидов и молекул тРНК Шотт и
др. [52] использовали сорбенты, содержащие диоксиборильное производное
В этом случае оказывается полезным комплексообразование незамещенных
2',3'-диольных групп, расположенных на З'-конпе полинуклеотидов с РНК и
боратным анионом. З-Аминофепилбор-ная кислота, присоединенная к
сукцинилированной аминододецил-целлюлозе, применена Сприизлем и др. [53]
для выделения тРНКр>*.
6.9. ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ, ГОРМОНОВ И ДРУГИХ ВЕЩЕСТВ
Додециламин является полезным аффинным лигандом для выделения липидов
[12], При выделении гормонов соответствующие антитела, транспортные белки
или лектины служат аффинными сорбентами (см. табл. 11.1). Примером
является аффинная хроматография лютеинизирующего гормона овцы на сефарозе
с ковалентно связанной иммуноглобулиновой фракцией антител к
лютеинизируюгцему гормону [23].
Холерный токсин, экзотоксин из Vibrio cholerae,- белок, ответственный за
желудочно-кишечные проявления клинической холеры. В среде культуры Vibrio
cholerae токсин присутствует в очень низкой концентрации, приблизительно
до 1 мг/л. Токсин сильно и специфически связывается некоторыми
ганглиозидами мозга. Моносиалоганглиоэиды Gmi, локализованные в мембране,
134
Глава 6
являются, по-видимому, естественными рецепторами, специфически
взаимодействующими с холерным токсином, в результате чего стимулируется
аденилатциклазная система в ткани. Ганглиозиды, связанные с
нерастворимыми носителями, служат аффинными сорбентами холерного токсина.
Этот токсин связывает также некоторые гликопротеины, такие, как фетуин >и
тироглобулин.
Рис. 6.15. Аффинная хроматография 1251-меченого токсина из Vibrio
cholerae на фетуин-агарозе (а) и на ганглиозиддпаминодипропиламино-
агарозе (б) [45].
0,5 мл соответствующего геля в пастеровских пипетках промывались 4 ч при
24 °С 50%-ным (по объему) метанолом, а затем 40 мл 7 Л1 гуанидинхлорнда н
40 мл гидрокарбонатного буфера Кребса-Рннгера* содержащего 0,!%
альбумина, Обраацы (0,5 мл), наносимые на колонки, содержали 5,1•10е
нмп./мнн 1251-меченого холерного токсина (6,7 мкКн/мкг) в
гидрокарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 0,1% альбумина.
Колонки промывались при 24 вС 20 мл того же буфера (разрыв на оси
абсцисс), затем элюировались 7 М гуаннднн-хлоридом (начало введения
Предыдущая << 1 .. 45 46 47 48 49 50 < 51 > 52 53 54 55 56 57 .. 198 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed