Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Туркова Я. -> "Аффинная хроматография" -> 45

Аффинная хроматография - Туркова Я.

Туркова Я. Аффинная хроматография — М.: Мир, 1980. — 472 c.
Скачать (прямая ссылка): afinnayahromatografiya 1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 198 >> Следующая

116
Глава 6
тервале 1400-9000, то даже 100-кратный объем 0,1 М уксусной
кислоты (pH 2,2) не может снять антитела с колонки. Антитела элюируются
только 4 М гуанидинхлоридом. Эти результаты получены с антителами одного
и того же животного в различные периоды программы иммунизации. Подобное
поведение наблюдалось также с антителами от разных 'Кроликов.
При использовании для приготовления специфического сорбента глюкагона,
модифицированного окислением перекисью водорода, алкилированием 2-окси-5-
нитробензилбромидом или нитрованием тетранитрометаном, для элюирования
антител из комплекса с иммобилизованным аффинным лигандом достаточны
значительно более мягкие условия. В то время как для эффективного
элюирования (пики появляются в объеме элюата, равного 2 объемам колонки)
с колонок с немодифицированным глюкагоном необходим 4 М гуанидинхлорид,
для аналогичного элюирования с 'колонок с глюкагоном, модифицированным
окислением перекисью водорода, алкилированием 2-окси-5-
нитробензиЛ'бромидом или нитрованием тетранитрометаном, эффективен 0,15 М
NaCl при pH 11.
Напротив, для выделения антигенов могут быть использованы
иммобилизованные антитела. Антигены могут принадлежать к весьма
разнообразным типам веществ, и поэтому в табл. 11.1 представлены антитела
как аффинные лиганды для выделения очень многих различных соединений.
На рис. 6.6 в качестве примера показано выделение интерфе-ронов
лейкоцитов человека на сефарозе с прикрепленными соответствующими
антителами [2]. Интерфероны являются гликопротеинами с молекулярной
массой ~25 000, которые обладают ро-до- или семейноспецифичной
антивирусной активностью против широкого спектра вирусов.
Иммобилизованные антитела рассматриваются ниже в раэд. 6.7 с точки зрения
их применения для выделения специфических пептидов. В этом плане
интересно также использование иммобилизованных антидинитрофенильных
антител для выделения трипсина в комплексе с динитрофенилиро-ванным
ингибитором трипсина из соевых бобов [63]. Иммобилизованные антитела
играют важную роль и при выделении клеток; эта проблема детально
обсуждается в разд. 6.10. Иммуносорбенты применяются не только для
выделения, они могут быть полезны для обнаружения структурных различий,
например между ядер-ными и митохондриальными дегидрогеназами [13].
6.4. ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕКТИНОВ, ГЛИКОПРОТЕИНОВ И САХАРИДОВ
Лектины - это белки или гликопротеины растительного (фи-тогемагглютинины)
или животного происхождения, проявляющие более или менее избирательное
сродство к углеводам или груп-
Выбор аффинных лигандов
117
нам углеводов. Эти белки, похожие на антитела, реагируют с компонентами
клеточной мембраны и агглютинируют эритроциты, опухолевые и эмбриональные
клетки [35]. Агглютинины с определенной специфичностью к сахарам могут,
следовательно, быть полезными при изучении поверхностных структур клеток,
транс-
Рис. 6.7. Хроматография осветленного диализованного неочищенного
экстракта семян кротолярии на: а - ECD- сефарозе 6В (сефароза 6В
обрабатывалась эпи-хлоргидрином в щелочной среде с последующим щелочным
гидролизом); б - ВСб^сефарозе 6В, обработанной кислотой в течение 3 ч
(0,2 М HCI, 50°С) [18]. Колонки 100X19 мм; скорость потона 15 мл/г; объем
фракции 2,5 мл. / - оптическая плот-ность при 260 нм; 2 - титр
гсмагглютннацнн; 3 - оптическая плотность при 540 нм (концентрация
сахара, определяемая орцнновыы методом). Стрелки уназывают начало
элюирования
буфером, содержащим лактозу,
формированных малигнизирующими опухолями и вирусами. Данные по выделению
аффинной хроматографией ряда лектинов приведены в табл. 11.1.
Для выделения ряда лектинов использованы продажные препараты
полисахаридов, такие, как сефадекс и сефароза. На рис. 6.7 представлены
результаты биоспецифической аффинной хроматографии фитоагглютининов из
неочищенного экстракта семян кроталярии (Crotalaria juncea) на ECD -
сефарозе после
Глава 6
3 ч обработки 0,2 М соляной кислотой при 50°С. Галактановые цепи
гидролизовались без полного разрушения матрицы геля. Тем самым
увеличивалось количество концевых галактозильных групп, необходимых для
специфической адсорбции гемагглютини-нов. Значение гидролиза хорошо видно
из сопоставления с результатами хроматографии того же экстракта в
аналогичных условиях на ECD-сефарозе необработанной кислотой (рис, 6.7,
а), Выделение агглютинина из зародышей пшеницы [34] на сефарозе с
ковалентно связанным 2-ацета'.чидо-Ы-(е-аминокапро-нил-2-дезокси-р-о-
глюколиранозиламином является примером использования специфического
сорбента, приготовленного ковалентным присоединением моносахарида к
нерастворимому носителю. Хорейши и Коцоурек [27] приготовили ряд
специфических сорбентов для выделения фитогемагглютининов из различных
источников путем сополимеризации алкенил-О-гликозидов с акриламидом и
Ы,Х'-метиленбисакриламидом. Таким способом полученные гидрофильные гели
содержат сахара, связанные О-гликозидными связями с алкильными боковыми
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 198 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed