Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
4.2. Определение констант диссоциации по данным фронтального
анализа........................................................51
4:3. Кооперативное элюирование олигоадениловой кислоты в хро-
матографии иа иммобилизованной полнуридиловой кислоте 55
4.4. Другие методы количественной оценки взаимодействий с
иммобилизованными аффинными лигандами .... 58
Список литературы....................................61
Глава 5. Общие вопросы связывания иа аффинном сорбенте ... 62
5.1. Стерическая доступность.......................................64
5.2. Конформация присоединенного аффинанта ..... 73
5.3. Концентрация аффинанта на матрице........................... 75
Содержание
469
5.4. Концентрация белков, время уравновешивания и скорость
потока...................................................81
, 5.5. Влияние
температуры..........................................86
5.6. Влияние pH и ионной силы.....................................90
5.7. Элюирование конкурентными аффинными лигандами . . 92
5.8. Неспецифические влияния......................................94
5.8.1. Влияние на неспецнфическую сорбцию ионной силы 94
5.8.2. Применение теории Дебая - Хюккеля при изучении зависимости
константы равновесия адсорбции и скорости десорбции фермента с замещенных
гелей от ионной силы...................................................96
Список литературы................................................102
Глава 6. Выбор аффинных
лигандов.......................................104
6.1. Высокоспецифичные сорбенты и сорбенты с групповой специфичностью
.....................................................104
6.2. Выделение ферментов, ингибиторов и кофакторов . . 108
6.3. Иммуноаффинная хроматография................................114
6.4. Выделение лектннов, гликопротеинов и сахаридов . . 116
6.5. Выделение рецепторов. Связывание и транспорт белков 122
6.6. Выделение SH-белков и пептидов............................124
6.7. Выделение специфических пептидов..........................126
6.8. Выделение нуклеиновых кислот и нуклеотидов .... 130
6.9. Выделение липидов, гормонов и других веществ . . . 133
6.10. Выделение клеток и вирусов.................................135
6.11. Продажные нерастворимые аффинные сорбенты . . 137
Список литературы................................................148
Глава 7. Гидрофобиаи хроматография, ковалентная аффинная
хроматография, аффинное элюирование н родственные методы 151
7.1. Гидрофобная хроматография...................................151
7.2. Ковалентная аффинная хроматография..........................158
7.3. Аффинное элюирование.....................................160
7.4. Аффинная пертурбация плотности...........................165
7.5. Аффинный электрофорез....................................166
7.6. Металлохелатная аффинная хроматография .... 170
Список литературы.............................................. 172
Глава 8. Нерастворимые носители и наиболее распространенные методы
иммобилизации лиганда.......................................... 174
8.1. Требования, предъявляемые к характеристикам носителей 175
8.2. Обзор наиболее распространенных нерастворимых носителей и методов
присоединения к ним................................177
8.2.1. Целлюлоза и ее производные...........................177
8.2.2. Диальдегидкрахмал-метиленднанилин (К-МДА) . 181
8.2.3. Декстрановые гели....................................183
8.2.4. Агароза и ее производные.............................184
8.2.5. Сополимер этилена и малеинового ангидрида . 199
8:2.6. Полиакриламидные носители п их производные > . 200
8.2.7. Оксиалкилметакрилатиые гели..........................205
8.2.8. Стекло н его производные.............................208
8.2.9. Другие носители......................................210
8.3. Пространственные группы.....................................210
8.4. Блокирование непрореагировавщнх групп.......................216
8.5. Десорбция присоединенного аффинного лиганда . . 219
470
Содержание
8.6. Общие замечания, касающиеся выбора сорбентов, пространственных
групп и методов связывания и блокирования . . 225
Список литературы..............................................232
Глава 9. Характеристика носителей и иммобилизованных аффинных лигандов
.........................................................236
9.1. Методы определения неспецифической сорбции .... 237
9.1.1. Определение адсорбционной емкости..................237
9.1.2. Определение остаточных отрицательно заряженных
групп..............................................237
9.2. Определение активируемых и активных групп .... 238
9.2.1. Определение карбохсильных, гидразндных и амннных групп кислотно-
основным титрованием .... 238
9.2.2. Определение свободных карбоксильных групп . 239
9.2.3. Определение свободных аминогрупп в полимерах путем конденсации с
2-окси-1-нафтальдегидом . . 239
9.2.4. Определение азидных групп..........................239
9.2.5. Цветная реакция с 2,4,6-трннитробепзолсульфонатом
