Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
матрице открывает много возможностей для исследований в различных
направлениях. Уже сегодня можно видеть, что исследования не будут
ограничиваться только использованием природных ферментов и имитацией
метаболических путей, осуществ-
сн3с
Субъединица
фермента
.CHjCHjOH
"-CHjCHflWBCHjOH
Рис. 12.8. Схематическая диаграмма активного комплекса
алкогольдегидрогена-
за-NADH-сефароза [13].
Фермент н аналог NADH - Ne-[(6 аминогекснл)карбамонлметнл]-ЫАОН - были
одновременно присоединены к активированной бромцианом матрице в условиях,
допускающих образование фермент-кофермеиткого комплекса. Кофермент был
регенерирован in situ путем проведения реакции окисления - восстановления
между двумя субстратами алкогольдегидрогеназы^ этиловым спиртом и
молочным альдегидом. Результаты показали, что эти иммобилизованные
фермеиТ'Коферментные комплексы ответственны почти за всю активность,
присущую препаратам, т. е. алкогольдегндрогеиазиую активность в
отсутствие свободного кофермента.
ляющихся в природе. Формирование различных условий микроокружения молекул
ферментов и возможность их модификации создают предпосылки для получения
высокоэффективных катализаторов, обладающих свойствами, отличающимися от
свойств нативных ферментов. Создание новых "искусственных" клеток,
осуществляющих полные метаболические превращения и циклы, также не
невозможно. Для этого независимого направления приготовления
искусственных биологических систем Мосбах [38] предложил название
"синтетичеокая биохимия".
На рис. 12.8 приведен пример так называемой "синтетической биохимии".
Гестрелиус и др. [13] присоединили алкогольдегидро-геназу ковалентно к
носителю, который уже содержал ковалентно
29*
444
Глава 12
связанный общий лиганд NAD+. Таким образом получен фермент, который в
отличие от нативного фермента не требовал для своей активности свободного
кофермента. Регенерация восстановленного кофермента, образующегося после
окисления спирта в ацетальде-гид, осуществлялась одновременным
добавлением "альтернативного" субстрата - молочного альдегида. Возможно,
что для других оксидоредуктаз для регенерации кофермента может быть
использована подобная пара субстратов [или может быть даже заменена
искусственными акцепторами и (или) донорами электронов]. Этот последний
пример ясно показывает близкое родство между аффинной хроматографией и
иммобилизацией ферментов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ахёп R., Ernback S., Eur. J. Biochem., 18, 351-360 (1971).
2. Иммобилизованные ферменты. Т. 1, 2./Под ред. И. В. Березина, В. К.
Антонова, К. Мартинека.-М.: Изд-во МГУ, 1976.
3. Berezin 1. V., Klibanov А. М., Martinek К., Biochim. Biophys. Acta,
364, 193-199 (1974).
4. Bouin J. С., Atallah Af. Т., Hultin H. O., Methods Enzymol., 44, 478-
488
(1977).
5. Brutnmer W" Hennrich N.. Kiockow M" Lang H" Orth H, D., Eur. J.
Biochem., 25, 129-135 (1972).
6. Chan W. W. C., Mort I. S., Chong D. К- K., MacDonald P. D. М., J.
Biol. Chem., 248, 2778-2784 (1973).
7. Chang Т. M. S., Nature (London), 229, 117-118 (1971).
8. Chang Т. M. S., Artificial Cells, Charles C. Thomas, Publisher,
Springfield,
111., 1972, pp. 1-207.
9. Chang Т. M. S., Gonda A., Derks J. H., Malove N., Trans, Am. Soc,
Artif. Ini Organs. 17, 246-257 (1971).
10. Datta R., Ollis D. F., Advan. Exp. Med. Biol., 42, 293 315 (1974).
11. Engasser J. М., Horvath C., Biochim. Biophys. Acta, 358, 178-192
(1974).
12. Gabel D., Kasche V., Biochem. Biophys. Res. Comm., 48, 1011-1018
(1972).
13. Gestrelius S., Mansson М. O., Mosbach K., Eur. J. Biochem., 57, 529-
535
(1975).
14. Gestrelius S. Mattiasson B., Mosbach K-, Eur. J. Biochem., 36, 89 96
(1973).
15. Goldman R., Goldstein L., Katchalski ?., in: Biochemical Applications
of Reactions on Solid Supports, G. R. Stark (Ed.) Academic Press, New
York, 1971, pp. 1-78;
16. Goldstein L., Biochim. Biophys. Acta, 315, 1-17 (1973).
17. Goldstein L., Katchalski ?., Z. Anal. Chem., 243, 375-396
(1968).
18. Goldstein L., Levin Y., Katchalski ?., Biochemistry, 3, 1913-1919
(1964).
19. Goldstein L., Pecht М., Blumberg S., Atlas D., Levin Y.,
Biochemistry, 9, 2322-2334 (1970).
20. Goodson L. H., Jacobs W. B., Davis A. W., Anal. Biochem., 51, 362-367
(1973).
21. Guilbault G. G., Pure Appl. Chem., 25, 727-740 (1971).
22. Guilbault G. G., Handbook of Enzymatic Methods of Analysis,
Marcel Dekker
New York, 1976, pp. 445-543.
23. Gurne D., Shemin D., Science, 180, 1188-1190 (1973).
24. Hornby W. ?., Fillipuson H., McDonald A., FEBS Lett., 9, 8-10 (1970).
25. Horton H. R., Swaisgood H. ?,, Mosbach K., Biochem. Biophys. Res.
Comm 61, 1118-1124 (1974).
Иммобилизованные ферменты
445
26. Johansson А. С., Mosbach К., Biochim. Biophys. Acta, 370, 339-353
(1974).
27. Jones J. В., in: Applications of Biochemical Systems in Organic
Chemistry, J. B. Jones, C. J. Sik, D. Perlman (Eds.), Wiley, New
York, 1976, pp. 1-46.
28. Kempner E. S., Miller J. H., Exp. Cell. Res., 51, 150-156 (1968).
