Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Трошин А.С. -> "Структура и функции биологических мембран " -> 27

Структура и функции биологических мембран - Трошин А.С.

Трошин А.С. Структура и функции биологических мембран — М.: Наука, 1975. — 345 c.
Скачать (прямая ссылка): strukturaifunkciibiologicheskihmembran1975.djvu
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 159 >> Следующая

Рис. 14. Влияние разобщителен дыхания и фосфорилирования на процесс разрушения митохондрий под действием липазы змеиного яда С. adamanteus
2 — контроль; 2 — 2,5*10_ь М ПХП; 3 — 1*10~4 М ДНФ; 4 — 3*10_6 М дикумарола; 5—1Л0-*
М КЦХ; 6 — 5*10-7 М ТТФБ
ферментов отражает степень их конформационных изменений (Rupley, 1967; Александров, 1969). Весьма важными для проведения подобных исследований были работы (Petruschka et al., 1959а; Condrea et al., 1965), в которых было показано, что действие фосфолипазы змеиного яда на изолированные митохондрии сопровождается набуханием, разобщением дыхания и фосфорилирования с последующим снижением дыхания. Эти явления были связаны с прогрессивным распадом фосфолипидов митохондриальных мембран и нарушением пространственной конфигурации их белковых компонентов. Опыты при одновременной регистрации изменения оптической плотности митохондриальной суспензии, интенсивности дыхания и уровня окислительного фосфорилирования показали, что при действии змеиного яда С. adamanteus набухание митохондрий, потеря дыхательного контроля, снижение уровня фосфорилирования, возрастание кислотных групп в белках митохондрий происходят значительно быстрее в присутствии ряда разобщителей (рис. 14), изменяющих конформацию митохондриальных мембран (Weinbach, Garbus, 1968а).
Действие протеолитических ферментов — проназы и трипсина на изолированные митохондрии значительно усиливается при введении в среду разобщителей окислительного фосфорилирования. Это явление рассмат-
62 СТРУКТУРНАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН
ривается как результат конформационных изменений белков митохондриальных мембран под воздействием разобщающих агентов (Weinbach, Garbus, 1968а). Проведенные исследования убедительно доказали по крайней мере два различных состояния макромолекулярных, фосфолипидных комплексов митохондриальных мембран, характеризующих активный процесс окислительного фосфорилирования и его изменения, индуцируемые действием разобщающих агентов. Наблюдаемый синергизм между действием фосфолипаз и протеаз, с одной стороны, и разобщающими агентами, с другой, можно рассматривать как результат взаимодействия разобщителей с белками митохондриальных мембран.
Установлено, что конформационные переходы белков, содержащих триптофановые и тирозиновые остатки, вызывают изменение УФ-флуо-ресценции (Inada et al., 1964а, Ь). В дальнейшем это явление было широко использовано при анализе изменений конформации белков митохондриальных мембран в разпых метаболических состояниях.
Так, на клетках асцитной карциномы Эрлиха было показано, что определенные структурные изменения митохондриальных ферментов сопровождаются колебаниями интенсивности их УФ-флуоресценции. Восстановление компонентов дыхательной цепи повышает интенсивность флуоресценции, а сдвиг уровня окисления-восстановления дыхательных ферментов в сторону окисления снижает интенсивность УФ-флуоресценции клеток (Шудель и др., 1964).
Изменения УФ-флуоресценции митохондрий были зарегистрированы при изменении метаболических состояний (по Чансу) изолированных митохондрий печени крыс. Наблюдаемые сдвиги интенсивности УФ-флуоресценции связаны с конформационными переходами белков митохондриальных мембран (Сороковой и др., 1971).
Физико-химический анализ белка изолированных митохондрий (Конев, 1965; Конев, Лыскова, 1965), находящихся в разных функциональных состояниях, показал изменения УФ-флуоресценции митохондриальных белков. Переход митохондрий из неэнергизированного состояния (среда без субстрата) в эпергизированное (при добавлении субстрата) сопровождался резким снижением интенсивности УФ-флуоресценции, причем это наблюдалось только при использовании в качестве субстрата янтарной и лимонной кислот. Добавление ацетата не изменяло уровень флуоресценции. В связи со сделанными наблюдениями было высказано предположение, что местные взаимодействия митохондриальпых ферментов с субстратом распространяются на всю мембрану (Конев и др., 1970). Зависимость между изменением интенсивности УФ-флуоресценции и сдвигами в метаболизме интактных митохондрий была установлена в работе Кацумата и сотр. (Kat-STimata et al., 1970), наблюдавших своеобразные колебания уровня флуоресценции. Так, добавление неорганического фосфата к митохондриям вызывает повышение флуоресценции, а введение сукцината сопровождается значительным ее тушением; добавление АМФ приводит к постепенному нарастанию флуоресценции, которая снижается после фосфорилирования АМФ в АТФ. Введение в среду антимицина А в начале опыта снимает действие сукцината и АМФ на интенсивность флуоресценции. Поскольку изменения ее интенсивности связаны с различными функциональными состояниями органелл, был сделан вывод, что колебания интенсивности флуоресценции отражают конформационные изменения белков митохондриальных мембран.
ГЛАВА 4. КОНФИГУРАЦИОННЫЕ ПЕРЕХОДЫ МЕМБРАН МИТОХОНДРИЙ 63
В 1969 г. Чанс с сотр. (Azzi et al., 1969; Chance et al., 1969; Montal et al., 1969) впервые применил флуорохром АНС- (8-анилин-нафталин-1-сульфонат) для выявления конформациоиных изменений митохондриальных белков и анализа состояния мембран митохондрий при разных уровнях их энергетического метаболизма. На фрагментах мембран митохондрий, флуорохромированных АНС~, было установлено, что перевод митохондрий в энергизированное состояние сопровождается изменением флуоресценции.
Предыдущая << 1 .. 21 22 23 24 25 26 < 27 > 28 29 30 31 32 33 .. 159 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed