Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
Методы извлечения жиров из растительных объектов основаны на способности этих веществ растворяться в неполярных растворителях. Существенным недостатком данного подхода представляется то обстоятельство, что, кроме жиров, в неполярных органических растворителях растворяются липоиды, эфирные масла, пигменты, фосфатпды и т. п. Поэтому жиры, извлекаемые органическими растворителями, называют сырыми.
Извлечение сырых жиров из исследуемых растительных объектов выполняют при помощи нелетучего органического растворителя, а затем определяют показатель преломления извлеченного раствора жиров и растворителя, которые значительно различаются между собой. Концентрацию жиров в исследуемом объекте рассчитывают по разности коэффициентов преломления. В качестве растворителей жиров семян берут бромнафталин и хлорнафталин.
Порядок работы. Подготовка растительного материала и экстракция жиров. Отобранные на разных стадиях формирования семена подсолнечника освобождают от семенной оболочки и подсушивают в сушильном шкафу при 130 °С в течение
30.. .40 мин до влажности не более 4%. Затем семена охлаждают до 40. ..50°С, размалывают на ударной мельнице, а муку помещают в эксикатор, где хранят в
бюксах над прокаленным MgS04 или СаС12 до начала работы.
Отвешивают 5 г муки из семян подсолнечника разных фаз спелости. Навеску помещают в фарфоровую ступку, добавляют 2.. .3 г прокаленного кварцевого песка и приливают 5 мл хлориафталина. Смесь тщательно растирают 3.. .4 мин, затем добавляют еще 15 мл растворителя и продолжают растирание, пока не получится однообразная мелкодисперсная кашица (весь этап растирания длится 8. ..10 мии). Перед рефрактометри-рованием суспензию фильтруют. Для этого берут чистую сухую коническую колбу, в которую вставляют воронку со складчатым бумажным фильтром. Суспензию из ступки переносят большими порциями на фильтр. Первые две-три капли фильтрата можно отбросить.
Определение содержания жиров. Определение ведут на жировом рефрактометре (РЖ)- Для этого барабан штуцера рефрактометра переводят в положение «1» и отсчеты делают по шкале. Затем открыв камеру рефрактометра, равномерно наносят оплавленной стеклянной палочкой на одну часть измерительной призмы четыре-пять капель профильтрованного раствора жиров. Капли должны быть средних размеров. Смешивание двух компонентов вызовет нерезкую и неравномерно окрашенную границу светотени. Если компоненты смешались, определение повторяют, уменьшив размер наносимых капель. Далее верхнюю часть камеры плавно закрывают до соприкосновения с нижней камерой.' Лимб нониуса устанавливают на нуль и, наблюдая в окуляр, направляют луч осветителя на выходную грань осветительной призмы (на ее правую или левую часть).
В поле зрения появляются две границы светотени: нижняя, близкая к показателю преломления растворителя, и верхняя, близкая к показателю преломления раствора. Необходимо установить осветитель так, чтобы была видна одна граница светотени. Поворотом кольца монохроматора устраняют дисперсию, добиваясь обесцвечивания границы светотени. Резкость и видимость границы светотени улучшают передвижением осветителя и диафрагмы, находящихся впереди осветительного окна.
Затем по шкале 1 делают отсчеты. Если граница светотени находится между двумя любыми делениями
шкалы, то вращением лимба нониуса против часовой стрелки доводят границу светотени до ближайшего верхнего деления. Показатель преломления определяют по шкале с точностью до 0,0002, а но нониусу — до 0,00002. Одно деление нониуса равно 0,00002. Установив лимб нониуса снова на нуль, осветитель перемещают горизонтально до получения второй' резкой границы светотени и, устранив дисперсию, делают отсчет. Перед новым определением тщательно протирают измерительную и осветительную призмы этиловым эфиром, а затем сухой ватой.
I Указатели преломления растворителя и раствора определяют три раза и за конечный результат берут среднее значение. Содержание жира (%) вычисляют по формуле
С— (я + ^Аж) Ат,
где а — коэффициент, показывающий, сколько жира приходится па отсчет 0,0001 при данном растворителе, %; b — постоянная величина для растворителя (хлориафталнна), равная 16 900; Ан<— разность между показателями преломления растворителя и раствора.
Данные опыта записывают по форме (табл. 56).
56. Определение содержания жиров
1
2
3
4
Материалы и оборудование. Семена подсолнечника разной степени спелости, хлорнафталин.
Фарфоровые ступки с пестиками, кварцевый песок, бюретки на 25 мл, фильтровальная бумага, воронки для фильтрования, конические колбы на 50 мл, весы лабораторные, мельница лабораторная ударная (кофемолка), рефрактометр жировой (РЖ).
Работа 69. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗ В ПРОЦЕССЕ ПРОРАСТАНИЯ СЕМЯН
Вводные пояснения. При прорастании семян масличных растений, отличающихся высоким содержанием тригли-
церидов, быстро уменьшается содержание жиров и одновременно увеличивается концентрация сахарозы. Образование углеводов из жиров — многоэтапный процесс, четко разграниченный в пространстве п во времени. С момента начала набухания семян масличных культур первым ферментом, воздействующим иа молекулу жира (триглицерид), служит нейтральная липаза. Установлено, например, что в семенах клещевины липаза активируется одной из протеиназ, присутствующих в эндосперме. Липаза ступенчато гидролизует триглицерид до диглицерида, моноглицерида и, наконец, до свободного глицерина и жирных кислот.
