Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
2 мин. Далее, соединяя поворотом пробки пространство
трубки с наружным воздухом, инфильтруют раствор и кусочки ткани.
Реакция восстановления нитратов до нитритов идет в анаэробных условиях, поэтому воздух из трубок вновь выкачивают в течение 5 мин. Затем выдерживают в ванне термостата при 37 °С 30 мин. После этого реакцию останавливают, перелив уксусную кислоту из шарика в реакционную среду. Если раство'р мутный, в него для осаждения белков добавляют 3 мл насыщенного раствора (NH4)2S04.
Надосадочную жидкость используют для определения нитритов. Для этого из каждой трубки отбирают пипеткой в пробирки по 10 мл раствора и добавляют по 2 мл реактива Грисса. Одновременно ставят контроль на реактивы: уксусную кислоту и насыщенный раствор (NH4)3S04 добавляют в реакционную смесь перед удалением воздуха.
Определение азота нитритов. Метод основан на образовании из сульфаниловой кислоты, а-наф-тиламина и нитритов азосоединения, окрашенного в розовый цвет. Реакция идет в две стадии. Вначале суль-фаниловая кислота, взаимодействуя с HNO2, дает ди-азосоединение, которое затем в реакции с а-нафтилами-иом превращается в конечный продукт:
/ HSOa
с6н4
N=N-C,0HcNH2
Линейная зависимость между окраской и содержанием иона N02~ сохраняется при концентрации N—N02 до 2 мг/л.
Оптическую плотность окрашенных растворов определяют на ФЭК, используя синий светофильтр. Так как окраска развивается медленно и в то же время при стоянии раствора исчезает, то измерения необходимо выполнять через равные промежутки после прибавления.реактива Грисса, обычно через 15.. .20 мин.
Концентрацию азота в пробе (N—NO2) рассчитывают по калибровочному графику. Для получения данных для его построения используют дважды перекри-сталлизованный нитрит натрия, высушенный при 85 °С до постоянной массы. При приготовлении стандартного маточного раствора навеску N—N02 в 0,4927 г (в 1 мл содержится 0,1 мг N), взвешенную на аналитических ве-
сах, переносят в мерную колбу на 1 л, доливают водой до метки. Раствор хранят в темной склянке в холодильнике.
Рабочий раствор получают разбавлением маточного в день определения нитратного азота. Для построения калибровочного графика используют концентрации N—N02 в интервале 0,02.. .0,5 мг/л.
Нитритный реактив Грисса состоит из равных объемов растворов сульфаниловой кислоты и а-нафтпл а мина. Для приготовления сульфаниловой кислоты 0,5 г химически чистого реактива растворяют в 100 мл 32 %-го раствора (d—l,04) уксусной кислоты. Вначале уксусную кислоту разбавляют дистиллированной водой вдвое, а затем доводят до нужной плотности но ареометру. Другой компонент смеси готовят растворением 0,1 г а-нафтиламина в 20 мл воды при нагревании; раствор фильтруют через стеклянный фильтр № 1 в колбу, содержащую 180 мл уксусной кислоты (d=l,04).
Результаты опыта записывают по форме таблицы 48. На основании полученных результатов делают выводы.
48. Активность нитратредуктазы в органах растений, мг N—N02/r сырой массы
Объект Показа Масса Масса
ния N---NOj
исследо Условия питания шкалы n~no2 па 1 г сырой
вания ФЭК в пробе, мг массы, мг
Листья +N03+Mo (контроль)
+ N03-MO + NH4+M0
Корни +NO3+M0 (контроль)
+ N03-MO +NH4+M0
Материалы и оборудование. Десяти-четыриадцатидневные проростки овса, смесь Хогланда — Снайдерса на перекристаллизоваи-ных солях, насыщенный раствор (NH4)2S04, уксусная кислота, 0,06 М фосфатный буфер (pH 7,2), 0,1 М раствор яблочной кислоты, соль НаэСОз, 0,1 М раствор KNO3; стеклянная вата, промытая концентрированной серной кислотой, а затем водой; реактив Грисса; калибровочный график для определения N—(N02.
Пробирки Тунберга, пробирки на 15 мл, пипетки на 1,5 и
10 мл, фотоэлектроколориметр, термостатная ванна, ареометры.
Глава 7
ОБМЕН ВЕЩЕСТВ
Обмен веществ — процесс, поставляющий все необходимые для жизнедеятельности организма соединения, а также энергию. Энергию, необходимую для сохранения сложной структуры живой растительной клетки, называют поддерживающей. Энергию, затрачиваемую на осуществление большинства функций клетки, например поглощение и выделение веществ, движение протопласта, новообразование органелл, реакции биосинтеза различных веществ, называют функциональной.
Обмен веществ клетки представляет собой огромное число физических и химических реакций, объединенных в пространстве и во времени в единое упорядоченное целое и подчиняющихся законам термодинамики. Упорядоченность реакций достигается благодаря ферментам, которые представляют собой биокатализаторы, в функции которых входит регулирование скорости отдельных химических реакций обмена веществ. Другим, не менее важным, регулирующим фактором служит молекулярная ультраструктура клетки, или ее пространственная организация (компартментация), заключающаяся в том, что клетка подразделена на микроскопические и субмикроскопические отсеки, в которых при помощи определенных групп ферментов происходят соответствующие реакции обмена веществ.
