Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
1 = аСЬ,
где / — интенсивность излучения; С — концентрация элемента; а и b — константы уравнения.
В пламенной фотометрии при определении концентрации калия используют следующие спектральные линии: 766,49 и 769,90 нм. Общая схема компоновки основных частей пламенного фотометра независимо от типа или марки представлена на рисунке 25.
При работе прибора опытный раствор 10 захватывается воздухом, поступающим от компрессора 1 через ресивер 12 и манометр 3 в горелку 8. Нормальное горение газа в горелке обеспечивается постоянством его давления, поддерживаемым при помощи манометра 4.
Рис. 25. Схема компоновки основных частей пламенного фотометра: / — компрессор; 2 — гальванометр; 3, 4 —- манометры (3 — регуляции давления сжатого воздуха; 4 — регуляции давления газа); '5 — диафрагма; С — интерференционный светофильтр; 7 — фотоэлемент; 8 — горелка; 9 — смеситель; 10 — опытный раствор; 11 — баллон с ацетиленом; 12 — ресивер
Спектр излучения, выделяемый возбужденными атомами калия, проходит через диафрагму 5, регулирующую поток излучения, затем интерференционный светофильтр 6 и, наконец, попадая на фотоэлемент 7, генерирует электрический ток, направляемый на гальвано-.метр 2. Величина генерируемого тока пропорциональна интенсивности спектрального излучения (соответственно концентрации калия в анализируемом растворе).
При определении содержания калия в образцах необходимо каждые 10.. .15 определений контролировать получаемые результаты, сверяя их с воспроизводимостью результатов анализа стандартных растворов или растворов, используемых для построения калибровочного графика.
Для приготовления стандартного раствора калия на аналитических весах отвешивают 1,910 г КС1 (чистый для анализа) и растворяют в литровой мерной колбе с дистиллированной водой. Такой раствор содержит точно 1000 мг калия в 1 л. Для приготовления калибровочной шкалы, например, на ряд концентраций 4, 6, 10, 15, 20 мг К+ на 1 л берут из стандартного раствора последовательно 4, 6, 10, 15, 20 мл и каждую порцию доводят до 1 л дистиллированной водой.
Материалы и оборудование. Десяти-четыриадцатидневные проростки пшеницы (овса, ячменя); стандартный раствор трилона Б, приготовленный растворением 9,3 г трилона в 1 л дистиллированной воды; рабочий раствор трилона, соответствующий концентрации 0,005 н., приготовляемый разбавлением стандартного раствора в десять раз; 10 %-й раствор КОН; 1 %-й мурексида, приготовленный при тщательном растирании 1 г мурексида с 99 г K2SO.,; 2,5 мМ раствор KCI (10 л) в бутыли с бюреткой; 5 мМ раствор СаС12 (10 л) в бутыли с бюреткой; 10“3 М раствор 2,4-ДНФ в склянках.
Пламенный фотометр, бюретки для трилоиомстрического титрования, стаканы на 50 мл, пипетки на 2 и 10 мл, калибровочный график на калий в интервале концентраций 4.. .20 мг/л, фильтровальная бумага.
Работа 63. ВЛИЯНИЕ ИСТОЧНИКОВ АЗОТНОГО ПИТАНИЯ И МОЛИБДЕНА НА НИТРАТРЕДУКТАЗНУЮ АКТИВНОСТЬ ТКАНЕЙ РАСТЕНИЯ
Вводные пояснения. Нитратредуктаза — фермент, непосредственно участвующий в восстановлении нитратов до нитритов. В состав его активного центра входит молибден. Синтез и активирование нитратредуктазы наблюдается только в присутствии нитратов. Другие источ-
ники азота не индуцируют синтез фермента и не влияют на его активность.
В связи с адаптивным характером фермента при постановке опытов необходимо используемые соли питательных элементов перекристаллизовывать, а питательные смеси готовить на бидистиллированной воде.
Порядок работы. Опыт осуществляют с растениями овса, выращенными на 0,2 н. измененной питательной смеси Хогланда —Снайдерса, в которой нитратный азот заменен на аммонийный—(NH4)2S04 в эквивалентных по азоту количествах. В этом случае нитрат кальция и калия заменяют на соответствующее количество сульфатов (образец расчета приведен в работе 57).
Растения выращивают в течение 10.. .14 дней при pH 6.. .6,2, после чего часть растений (2/з общего количества) переносят на 0,2 н. неизмененную питательную смесь с KN03 и Са(ЫОз)г в качестве источника азота и выдерживают на ней двое-трое суток. Другую часть растений оставляют на то же время на смеси прежнего состава с (NH4)2S04; при этом смесь следует обновить.
В свою очередь, растения на нитратном фоне также делят на две группы: одна получает молибден ( + Мо), другая — нет (—Мо). Таким образом, в опыте три варианта: контроль (источник азота—нитраты + молибден) и два опытных (источник азота—нитраты без молибдена; источник азота—аммонийный азот).
Определение активности нитратредук-тазы по Мульдеру. Листья или корни нарезают острой бритвой полосками или дисками шириной около
2 мм, берут навески по 0,5 г и помещают в трубки Тун-берга. Затем в каждую трубку вносят по 5 мл фосфатного буфера (0,06 М, pH 7.2), 1 мл 0,1 М раствора яблочной кислоты, нейтрализованного предварительно содой (до прекращения выделения пузырьков), 1 мл 0,1 М раствора KN03 и 2 мл воды. В шарики пробок трубок Тунберга вводят по 1 мл уксусной кислоты.
Чтобы срезы растительного материала не всплывали, в трубки помещают тщательно промытую вначале концентрированной серной кислотой, а затем водой стеклянную вату. После этого трубки закрывают пробками и удаляют из них воздух вакуумным насосом в течение
