Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Третьяков Н.Н. -> "Практикум по физиологии растений" -> 47

Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.

Третьяков Н.Н. Практикум по физиологии растений — М.: Агропромиздат, 1990. — 271 c.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка): praktikumpofiziologii1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 102 >> Следующая

td
где D~ оптическая плотность, равная 0,250; d — толщина слоя жидкости (толщина кюветы), см; / — время, с; а —отношение количества жидкости, взятой для приготовления вытяжки, мл, к массе навески, г; (3 — степень дополнительного разведения вытяжки (если это потребуется); у — степень постоянного разведения вытяжки в реакционной смеси (при данных условиях — 4).
Результаты отражают изменение оптической плотности за 1 с на 1 г сырой массы ткани. Определяют активность пероксидазы в листьях верхнего и нижнего ярусов или -в проростках злаков, выращенных в разных условиях. Результаты опыта записывают но форме (табл. 30).
30. Определение активности пероксидазы
Ярус
ООъем Разведе Толщи - Время
ние ВЫ
Навес экст ТЯЖКИ в 1 а слоя изменения
ка, г ракта, реакци- жидкости окраски
мл ОН1 ой в кювете, раство
смеси см ра, с
Активность пероксидазы, изменение оптической плотности за 1 с на 1 г сырой массы
Верхний
Нижний
Материалы и оборудование. Клубни картофеля, 1 %-й раствор гидрохинона, 3 %-й раствор перекиси водорода.
Ножи, терки, марля, воронки, конические колбы на 50 мл, пробирки в штативе, пипетки на 1 н 10 мл.
Растение с листьями нескольких ярусов; проростки пшеницы, ячменя нли других культур; клубни картофеля; ацетатный буферный раствор с pH 5,4; раствор бепзидина на ацетатном буфере; 0,03 %-й раствор перекиси водорода.
Мерные колбы на 25 мл, пипетки на 2 мл, фарфоровые ступки с пестиком, секундомеры, центрифуга с пробирками, ФЭК.
Приготовление бензидина, В мерную колбу на 200 мл, наполненную на 2/з дистиллированной водой прибавляют 2,3 мл (2,4 г) ледяной уксусной кислоты и 184 мл бензидина. Колбу подогревают примерно до 50.. .60 °С на водяной бане при постоянном
взбалтывании. После полного растворения бензидина (10. ..15 мин) добавляют 5,45 г ацетата натрия, полностью его растворяют, колбу охлаждают и доливают водой до метки, В темном месте раствор можно хранить семь—десять дней.
Работа 49. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ
ОРТОДИФЕНОЛОКСИДАЗЫ ПО БОЯРКИНУ
Вводные пояснения. Полифенолоксидаза катализирует окисление ортоднфеиолов в присутствии кислорода с образованием воды и ортохинонов. Ферментная система окисляет также монофенолы.
Принцип метода определения активности ортодифс-нолоксндазы тот же, что и для пераксидазы по Бояркину (см. работу 48).
Порядок работы. Растирают в ступке с фосфатным буфером (pH 7,0.. .7,4) 0,5. ..1 г растительного материала, переносят в мерную колбу на 25 мл, доводят до метки и центрифугируют в течение 10 мин при интенсивности вращения 3000 мин-1.
Техника определения на ФЭК та же, что и при определении активности пероксидазы. В две кюветы толщиной 2 см вносят по 2 мл вытяжки, 2 мл воды или буферного раствора, 2 мл раствора парафенилендиамина в каждую. Обе кюветы ставят на ФЭК. Уравнивают световые потоки. При этом стрелка гальванометра стоит па нуле. Отсчетный правый барабан переводят на 0,250 деление оптической плотности. Определение ведут при желто-зеленом светофильтре.
В левую кювету вносят 2 мл воды, в правую — 2 мл раствора пирокатехина. Отмечают по секундомеру время от начала приливания пирокатехина до момента, когда стрелка гальванометра достигнет нулевого положения. Подбирают такие разведения вытяжки, при которых время изменения окраски не превышает 30... 60 с.
Активность фермента рассчитывают по той же формуле, что и активность пероксидазы. Результаты записывают по следующей форме:
Объект Навес Объем Разведение Толщина Время изме- Изменение
ка ма экст вытяжки в СЛОЯ жид Iеиия окраски оптической
териа ракта, реакцион кости в раствора, с плотности
ла, г мл ной смеси йовете, за J с на 1 г
см сырой массы
1 1 |
Материалы и оборудование. Растение с несколькими ярусами листьев, клубни картофеля или другой растительный материал, 1 %-й раствор пирокатехина (готовят перед определением), 0,01... 0,02 %-й раствор парафенилендиамина иа 0,01 н. щавелевой кислоте (можно использовать диметилпарафенилеидиамип, который растворяют в воде), фосфатный буферный раствор (pH 7. ..7,5).
Мерные колбы на 25 мл, пипетки на 2 мл, фарфоровые ступки с пестиками, секундомеры, центрифуга с пробирками, ФЭК.
Работа 50. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ КАТАЛАЗЫ В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ
Вводные пояснения. В процессе дыхания в качестве побочного продукта окисления веществ образуется перекись водорода, оказывающая в высоких концентрациях токсичное действие на цитоплазму. Нейтрализация перекиси водорода при участии фермента каталазы идет до воды и молекулярного кислорода по уравнению
каталаза
2Н202------¦—* 2Н20 + 02
Об активности каталазы судят по объему кислорода, выделяющегося в результате разложения перекиси водорода.
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 102 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed