Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Третьяков Н.Н. -> "Практикум по физиологии растений" -> 45

Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.

Третьяков Н.Н. Практикум по физиологии растений — М.: Агропромиздат, 1990. — 271 c.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка): praktikumpofiziologii1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 102 >> Следующая

Будучи тесно связанным со всей жизнедеятельностью растений, дыхание наряду с фотосинтезом оказывает
непосредственное влияние на их продуктивность. Дыханию принадлежит важная роль в обеспечении защитных реакций растений.
Наиболее общий показатель скорости окисления— интенсивность дыхания, о которой можно судить по поглощению кислорода, выделению диоксида углерода и окислению органического вещества. Другие показатели дыхательного метаболизма: величина дыхательного
коэффициента, соотношение гликолитического и пенто-зофосфатного путей распада сахаров, активность окислительно-восстановительных ферментов. Об энергетической эффективности дыхания можно судить по интенсивности окислительного фосфорилирования митохондрий.
Перечисленные показатели могут быть использованы для характеристики физиологических свойств и состояния растений.
Работа 46. ОБНАРУЖЕНИЕ ДЕГИДРОГЕНАЗ В РАСТЕНИИ ПО ВОССТАНОВЛЕНИЮ ДИНИТРОБЕНЗОЛА
Вводные пояснения. Дегидрогеназы — ферменты, катализирующие отщепление водорода от дыхательного субстрата и перенос его к промежуточным или конечным акцепторам водорода.
Обнаружение дегидрогеназ основано на введении в живую растительную ткань акцептора водорода — ди-нитробеизола, восстановление которого сопровождается изменением окраски ткани. При недостатке кислорода бесцветный орто- и парадииитробензол, присоединяя водород от восстановленных дегидрогеназ, необратимо восстанавливается в дышащих тканях в желтый орто-и пара-нитрофенилгидроксиламин и далее в орто- и па-ра-иитроанилин также желтого цвета.
Орто- и паранитрофенилгидроксиламин дают в щелочной среде соответственно фиолетовое и красное окрашивание, а вместе — пурпурное.
Порядок работы. В две пробирки наливают по 5 мл насыщенного раствора дииитробензола*. Из свежего клубня картофеля вырезают два одинаковых столбика
* Динитробензол ядовит. После работы с ним тщательно моют руки.
длиной 3.. А см, толщиной и шириной около 1 см. Ткани одного из них убивают кипячением в воде в течение 1...2 мин (после кипячения пробирку охлаждают). В каждую пробирку с раствором дннитробеизола погружают ио одному столбику и выдерживают 1. . .3 ч при комнатной температуре или в термостате при 30... 35 °С.
В конце опыта сравнивают окраску столбиков и растворов в обеих' пробирках. Затем подщелачивают содержимое пробирок, прибавив 10. ..15 капель аммиака, и через 5. . .15 мин, .когда аммиак проникнет в ткани столбиков, вновь сравнивают окраску. Делают выводы по результатам опыта. Результаты опыта записывают по форме (табл. 28).
28. Обнаружение дегидрогеназ в растении
Окраска ткаш и растцора в конце опыта
Ткань без добавления после добав-
аммиака л01 ия аммиака
Живая
После кипячения
Материалы и оборудование. Клубни картофеля, насыщенный раствор динитробензола, 10 %-й раствор аммиака.
Ножи, мерные цилиндры на 10 мл, пипетки на 1 мл, фарфоровые тарелки или стеклянные пластинки, штативы с пробирками.
Работа 47. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ДЕГИДРОГЕНАЗ МЕТОДОМ ВАКУУМ-ИНФИЛЬТРАЦИИ ПО ПЫЛЬНЕВУ
Вводные пояснения. В основу метода положена способность дегидрогеназ восстанавливать бесцветные соли тетразолия с образованием окрашенного формазана. Бесцветный 2,3,5-трифенилтетразолий, присоединяя водород, восстанавливается до формазана красного цвета. Формазан нерастворим в воде, но хорошо растворяется в ацетоне или изопропиловом спирте.
Метод позволяет работать с навесками материала небольшой массы и выявлять активность дегидрогеназ как в бесцветных, так и в окрашенных пигментами тканях. При работе выбирают однородный материал и
разрезают крупные объекты на пластинки толщиной
1,5.. .2 мм.
Порядок работы. В маленькие бюксы берут три навески по 30. ..100. мг предварительно разрезанного на пластинки растительного материала. Две навески заливают 5 мл раствора трифенилтетразолия, приготовленного на буферной смеси, третью (контрольную) погружают в 5 мл чистой буферной смеси. Исследуемый материал сверху придавливают небольшим грузом (стеклянной пробкой) и помещают в вакуум-эксикатор, из которого масляным насосом выкачивают воздух. После прекращения выделения пузырьков в течение 1...2 мии снова впускают воздух, под давлением которого раствор начинает проникать в ткани. Бюксы закрывают крышками и переносят на 30 мии в термостат с температурой 37°С, где ткани приобретают красный цвет, интенсивность которого зависит от активности дегидрогеназ.
Затем каждую пробу вынимают из бюкса и тщательно растирают в ступке с небольшим количеством ацетона или изопропилового спирта. Содержимое ступки переносят в мерный цилиндр и доводят объем до 5. ..10 мл в зависимости от интенсивности окраски. Остатки измельченной ткани должны полностью обесцветиться.
После растирания все пробы центрифугируют в течение 3 мин при интенсивности вращения 1500 мин-1, и полученный окрашенный формазаиом экстракт сразу колориметрируют на ФЭК при синем светофильтре. Если контрольная вытяжка зеленая, то, чтобы снять чцвет хлорофилла, колориметрируют при зеленом светофильтре. Активность дегидрогеназ представляет собой разницу оптических плотностей по показаниям ФЭК в опытных и контрольных пробах. Эту разницу, выраженную в целых числах, называют индексом активности дегидрогеназ.
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 102 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed