Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
X. К. Аликов предложил вместо титрования бихромата калия солыо Мора определять непосредственно восстановленный Сг+3 колориметрическим методом. Последнее основано на том, что при окислении растительного материала хромовой смесью ионы Сг+6 желтого цвета восстанавливаются до ионов Сг+3 синего цвета. Количество образовавшихся ионов Сг+3 находится в линейной зависимости от содержания органического углерода, подвергшегося окислению. Измерение концентрации ионов Сг+3 выполняют на фотоэлектроколориметре с желтым светофильтром (Л,тах = 582 нм). В этом случае ионы Сг+6 практически не мешают определению ионов Сг+3.
Преимущество фотоколориметрического метода состоит в том, что он освобождает экспериментатора от целого ряда операций, связанных с титрованием, приготовлением растворов соли Мора, окислительно-восстановительного индикатора и др. Кроме того, последний метод позволяет с большей точностью определять содержание углерода в растительном материале. Его
можно использовать в лабораторных и полевых условиях для сравнительных исследований. Однако при этом надо очень тщательно подходить к отбору растений, особенно при работе в поле. Важное значение имеет также число повторностей при самом определении органического углерода в листьях. Чтобы получить сравнимые и воспроизводимые данные, каждое определение должно состоять, по крайней мере, из трех-четырех анализов.
Значительные погрешности метода связаны с трудностью учета затрат органических веществ на дыхание и отток их из листа в другие органы растения. Все перечисленные моменты не обесценивают описанный ме-чтод, но о них нужно пом пить в тех случаях, когда на ^основании полученных с его помощью данных делают далеко идущие выводы.
Порядок работы. Сверлом вырезают из листа определенного яруса диски (оптимальное количество которых необходимо определить до начала опыта) и помещают их в пробирку (или коническую колбу), в которую из бюретки приливают 10 мл 0,2 и. хромовой смеси. Реакционную смесь слабо кипятят в течение 5 мин на песчаной бане, газовой горелке с 'асбестовой сеткой или электрической плитке. После полного охлаждения раствор из пробирки количественно переносят дистиллированной водой в мерную колбу на 50 мл, доводят до метки и тщательно перемешивают. Оптическую плотность раствора определяют в кювете -с толщиной слоя 3 см па фотоэлектроколориметре с желтым фильтром № 7. Одновременно выполняют контрольное определение (без растительного материала), тщательно соблюдая все указанные выше операции.
Показания шкалы барабана переводят в величины концентрации глюкозы при помощи калибровочного графика. Для этого в десять пробирок приливают соответственно 0,1; 0,2 и т. д. до 1,0 мл стандартного раствора глюкозы и по 10 мл 0,2 н. хромовой смеси. В одиинад-цатую пробирку только 10 мл хромовой смеси. Содержимое всех пробирок слабо кипятят в течение 5 мин. После охлаждения растворы из пробирок количественно переносят в мерные колбы на 50 мл, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и изме-. ряют оптическую плотность (D) в кювете с толщиной слоя 3 см (светофильтр № 7). На оси абсцисс откла-
дывают концентрацию глюкозы '(мг на 50 мл), а на оси ординат — соответствующие I им значения оптической плотности. Точки пересечения соединяют и получают калибровочный график.
Наиболее точно определить содержание органического вещества в растительном материале в пересчете на углерод можно при оптической плотности опытных растворов в пределах 0,40±0,15.
Учитывая соотношения атомной (или молекулярной) массы, выполняют пересчет органического вещества на углерод (Мс)или диоксид углерода (Afco2):
Мс = 0,4А1Гл; (1)
¦Л^сог1^" 1>47Л1Гл, (2)
где Мгл — количество глюкозы, соответствующее содержанию органического вещества в растительной пробе, мг; 0,4 и 1,47 — коэффициенты пересчета соответственно па углерод и диоксид углерода.
Количество углерода органического вещества (вмг), содержащегося в кусочке листа площадью в 1 дм2, рассчитывают по формуле
0,4МглЮ0
X - , (3)
где S — площадь высечек, см2, остальные обозначения те же, что в формулах (1) и (2).
Результаты опыта записывают по форме (табл. 26).
26. Определение интенсивности фотосинтеза
Время определения
Э <и
с. U
S я
С и
а а
<и -[0 л ю л О §
с а*
Содержание глюкозы по калибровочному графику, иг [»а 50 мл
cd cd
М Эе.
О
Иггепси в-ность фотосинтеза, мг углерода pa X дм2 листа n I ч
Начало опыта После пребывания па свету в течение 2 ч
Материалы и оборудование. Растения кукурузы, пшеницы или подсолнечника. Пробирки (пли конические колбы) на 100 мл, бюретки, мерные цилиндры иа 100 мл, погбочиые сверла диаметром 5. ..10 мм, фотоэлектроколориметр ФЭК-56М.
Приготовление хромовой смеси, содержащей катализатор. Для приготовления 1 л 0,4 н. раствора бихромата калия 119,614 г К.2СГ2О7 растворяют в 500 мл дистиллированной воды, переносят в мерную колбу на 1 л. В качестве катализатора приливают 10 мл
