Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
мелкие кусочки и помещают в пробирки для элюирования: в первую — с хлорофиллом Ь, во вторую — с хлорофиллом а, в третью — с виолаксантином, в четвертую — с лютеином и в пятую — с каротинами. В каждую пробирку наливают по 5 мл ацетона. Элюируют пигменты в течение 15 мин. В элюатах определяют концентрацию пигментов на фотоэлектроколориметре, используя красный светофильтр для хлорофиллов, синий — для каротиноидов.
При колориметрировании каротиноидов в качестве стандартного используют раствор К2СГ2О7. На аналитических весах отвешивают 290 мг К2СГ2О7, переносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в дистиллированной воде, доливают водой до метки и тщательно перемешивают; 1 мл приготовленного раствора по окраске соответствует 2,35 мкг каротина и 2,52 мкг ксантофилла.
Из исходного раствора последовательным разбавлением готовят в мерных колбочках на 100 мл серию стандартных растворов, определяют их оптическую плотность на фотоэлектроколориметре с синим фильтром и на основании полученных данных строят калибровочный график. Данный график используют для установления концентрации каротиноидов. Однако лучше в качестве стандартных применять растворы каротиноидов, концентрацию которых можно определить на спектрофотометре.
Содержание пигментов рассчитывают по формуле (мг/г массы сырых листьев):
tun ’
где С — концентрация пигмента, найденная по калибровочному графику, мг в 1 мл раствора; V — общин объем вытяжки, мл; v — объем элгаата, мл; т — навеска листьев, взятая для анализа, г; п—объем вытяжки, нанесенный па хроматографическую бумагу, мл.
Концентрацию пигментов можно определить также на спектрофотометре.
Результаты определения записывают по следующей форме:
Материалы и оборудование. Листья растений, ацетон, бензин, бензол, хлороформ, пзопропилоный ецпрг, хлорид натрия (насыщенный раствор), сульфат натрия прокаленный, вазелпп, СаСОа, кварцевый песок.
Весы, ножницы, ступки с пестиками, вакуумные градуированные пробирки па 25 мл .или колбы Бунзена, стеклянные фильт-. ры № 2, воронки делительные, пробирки градуированные на 10 мл, пробирки обыкновенные с пробками, стаканы химические на 150 мл, цилиндры на 50 мл, пипетки па 5 мл, пинетки па 0,5 мл, цилиндры с крышкой или корковой пробкой, обернутые темной бумагой (25X7 см), хроматографическая бумага размером 25X5 ем, вентиляторы пли феи, штативы для пробирок, предметные стекла, нитки суровые, линейки, ФЭК, насос,
Работа 42. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ФОТОСИНТЕЗА ПО ПОГЛОЩЕНИЮ СО;, В ТОКЕ ВОЗДУХА
Вводные пояснения. На ход фотосинтеза большое влияние оказывают как внутренние факторы (вид растения, его онтогенетическое состояние, структура и возраст листа, содержание хлорофилла, отток асспмилятов), так и внешние условия (интенсивность света, концентрация СОг, температура, уровень снабжения элементами минерального питания и водой).
Для характеристики ассимиляционной деятельности растений обычно пользуются величинами интенсивности фотосинтеза. Наблюдения за изменениями этого показателя имеют важное значение для познания физиологии, сравнительной физиологической оценки растений, их взаимоотношений в фитоцеиозах.
Значимость подобных исследований особенно возросла в последнее время в связи с разработкой теоретических основ управления фотосиитетической продуктивностью сельскохозяйственных культур и селекцией высокоурожайных форм растений.
Все существующие методы определения интенсивности фотосинтеза основаны па измерении количеств
веществ, участвующих в данном процессе. Исходя из общего уравнения фотосинтеза
/IV
6СО2 "Ь 6Н2О-------—Cg Ы^ОеН” 6O2 I
пигменты
в качестве таких показателей можно использовать количества: поглощенного диоксида углерода, выделившегося кислорода, других веществ, а также энергии, поглощенной пигментами или связанной в ассимилятах.
Наиболее часто интенсивность фотосинтеза определяют по поглощаемому диоксиду углерода, реже — по выделяемому кислороду и количеству синтезируемых органических продуктов. Что касается воды, то этот показатель очень трудно использовать из-за высокой оводненности растительных тканей. Учет энергии осуществляют только в специальных исследованиях. Объектами исследования могут служить как отдельные органы — лист, стебель, колос, так и целые растения, фитоценозы. Однако методические приемы определения интенсивности фотосинтеза всех указанных объектов во многом близки. В дальнейшем все определения будут рассмотрены на примере листа.
Сущность метода состоит в учете количества диоксида углерода в потоке воздуха, прошедшего мимо листа растения. Для этого лист заключают в камеру, через которую непрерывно с определенной скоростью продувают воздух,'и учитывают разность содержания газа на входе и на выходе камеры. При известном расходе воздуха нетрудно рассчитать количество СОг, поглощенного листом. Определяемая величина интенсивности фотосинтеза будет тем достовернее, чем больше разность концентраций диоксида углерода в воздухе на входе и выходе из камеры.
