Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
для 100 %-го ацетона (по Хольму — Веттштейну):
СХл.а~9,784/)бб2” 0,990/^644 5 Схл.ь = 21,426Z)e44—4,650D6C2 >
^хл.а+хл.Ь — 5,134Da82+20,4361) 644;
Скар — 4,695^440,5—О^ббСхл.а+хл.Ь » для 85 %-го раствора ацетона (по Ре'ббелену):
Схп.а— 10,3-D663 — 0,918-0644 »
Схл.ь ='19,7,0644-3,87^603 ;
Схл:а+хл.Ь — 6,4-ОббЗ"1" 18,8-0044 5 Cimp — 4, 75ZVr. |0,226Схл.а+хл,Ь ! для 80 %-го раствора ацетона (по Вернону): Схл.а«11,63Аю-2|390в*в;
С'хл.ь = 20,1 Шб49~ 5,181)бс5;
Схл.а+хл.Ь“6,45/)об5~1- 17,72/^649 » для 96 %-го раствора этанола:
Схл.а— 13,70/)cg5 5,76/)б49;
Схл.ь =: 25,80/)649—7,60De65;
Схл.а+хл.Ь^ 6,1 о/)665 “Ь 20,04/)б49 — 25,1 /)054 ’» для этилового эфира:
СХл.а=9,93/) Geo—0,78-0 642,5:
Схл.& = 1 7,6/)642,5 2,8 1 -О660 i
Схл.а+хл.Ь =7, 12/)660+ 16,8/)642,5 ’>
1000?>4во — 0,52 Сх л. а—7,25Схл.й
С— •-----------------------------
226
где СхЛ.а, Схл.ь, Схя.а+хл.ь и С,— соответственно концентрации хлорофиллов а, Ь, их суммы и каротиноидов, мг/л; D—экспериментально полученные величины оптической плотности при соот-. ветствующих длинах волн.
16 15 W 13 12 // JO
Рис. 15. Спектрофотометр СФ-26:
/ — шкала монохроматора; 2 —- рукоятка переключения источника излучения; 3 кюветное отделение; 4 — рукоятка переключения фотоэлементов; 5 — рукоятка установки чувствительности; б — рукоятка установки стрелки измерительного прибора на нуль; 7 — рукоятка шторки; 8 — рукоятка перемещения каретки с кюветами; 9— рукоятка регулирования ширины щели; 10 — шкала измерительного прибора; 11 — рукоятка отсчета для выбора шкалы измерений (имеет четыре положения); 12 — рукоятка компенсации; 13 — рукоятка установки длин волн; 14 — сигнальная лампа включения лампы накаливания «Н»; 15 — сигнальная лампа включения дейтериевой лампы «Д»; 16 — тумблер включения прибора в сеть и сигнальная лампа <Сеть»
Общий вид спектрофотометра дан на рисунке 15.' В приборе есть два источника сплошного спектра: дей-териевая лампа — для работы в интервале 186. ..350 нм (положение «Д») и лампа накаливания для работы в интервале 340.. .1100 нм (положение «Н»).
При определении оптической плотности хлорофиллов и каротиноидов в вытяжке переключатель ламп (фотоэлемент и источник излучения) устанавливают в рабочее положение. При определении оптической плотности хлорофиллов рукоятку переключателя фотоэлемента 4 переводят в положение «К». После этого закрывают фотоэлемент, поставив рукоятку шторки 7 в положение «ЗАКР.», а рукояткой регулировки ширины щели 9 устанавливают ширину щели примерно 0,1 мм.
Затем тумблером 16 включают прибор в сеть. Если загорятся сигнальные лампы «СЕТ.» и «Н», можно выполнять последующие операции, но предварительно прибор должен прогреться 30.. .60 мин.
После этого рукоятку компенсации 12 ставят на «0», рукоятку отсчета 11 в положение «1» и рукоятку чувствительности 5 в положение «1». Медленно вращая рукоятку 13, устанавливают нужную длину волны (для хлорофилла а — 663 нм, хлорофилла b — 644 нм). Затем помещают кюветы с растворителем и исследуемым раствором (110 мм) в кюветодержатель и закрывают кю-ветное отделение 3.
При закрытом фотоэлементе при помощи рукоятки установки нуля 6 добиваются нулевого положения стрелки измерительного прибора (по верхней шкале), после чего рукояткой 4 открывают фотоэлемент (при этом на пути светового потока должна стоять кювета с растворителем) и, регулируя ширину щели рукояткой 9, ставят стрелку на «0» нижней красной шкалы. Затем кювету с исследуемым раствором переводят в рабочее положение (рукоятка 8) и измеряют оптическую плотность (экстинкцию) по шкале Д. Результаты записывают по форме (табл. 25). Закрывают фотоэлемент и устанавливают длину волны для другого хлорофилла,
25. Схема записи результатов
Оптическай цлоп.ость
Вариант Наоеска Объем ^1МЭ D (171 ® iiiiB
листьев, мг вытяжки, мл
1 1 I
Продолоюете
Вариант Содержание пигментов в Содержание пигментов, %
вытяжке, мг на 26 мл массы сырых листьев
ХЛОро- хлоро хлорофилл каро- хлоро хлоро хлорофилл йаро-
фи л л а филл b а+хлоро- тино- филл а филл ь a-f хлоро типо-
филл b иды филл ь иды
| | |
дальше в той же последовательности определяют экс-тннкцию. При определении оптической плотности каро-тиноидов предварительно переводят рукоятку переключения фотоэлементов 4 в положение «Ф» и устанавливают длину волны 452,5 нм.
Концентрацию пигментов рассчитывают по Реббеле-ну. Определив концентрацию пигмента, находят его содержание в опытном материале по той же формуле, что и в предыдущей работе.
