Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тейлор Д. -> "Биология в 3 томах. Tом 3" -> 219

Биология в 3 томах. Tом 3 - Тейлор Д.

Тейлор Д. , Грин Н., Стаут У. Биология в 3 томах. Tом 3. Под редакцией Сопера Р. — М.: Мир, 2004. — 451 c.
ISBN 5-03-003687-3
Скачать (прямая ссылка): biolv3tt32004.PDF
Предыдущая << 1 .. 213 214 215 216 217 218 < 219 > 220 221 222 223 224 225 .. 280 >> Следующая


В зависимости от природы используемой неподвижной среды различают три главных типа хроматографии: бумажную, колоночную и тонкослойную. Бумажная хроматография описана в опытах П. 1.1.—П. 1.3. и в разд. 7.6.3. Различные хроматографические методики широко используются в настоящее время в химии, биологии, биохимии и в таких специальных областях, как судебная медицина.

Электрофорез

Электрофорез представляет собой одну из модификаций хроматографии, применяемую для разделения молекул, несущих заряды. В хроматографической среде под влиянием приложенного электрического поля одна сторона оказывается заряженной положительно, а другая — отрицательно. Отдельные молекулы в разделяемой смеси движутся к той или другой стороне в зависимости от их относительных масс и зарядов. Электрофорез широко применяется для выделения и идентификации аминокислот; дальнейшее усовершенствование методики достигается в этом случае регулированием pH среды.

П. 1.7.1. Величины Rf

При хроматографии подвижность растворенного вещества относительно фронта растворителя постоянна для данного вещества. Это может быть выражено величиной Rf как показано ниже:

Расстояние, пройденное растворенным веществом f Расстояние, пройденное фронтом растворителя

Если фронт растворителя выходит за пределы бумаги, то подвижность данного растворенного вещества можно выразить в сравнении с подвижностью другого стандартного вещества. Тогда

Расстояние, пройденное растворенным веществом

Rx =-- Расстояние, пройденное стандартным веществом х

См. рис. П. 1.6, В.

П. 1.7.2. Двухмерная бумажная хроматография

Хроматографией, идущей только в одном направлении, не всегда можно эффективно разделить сложную смесь

БОТАНИКА

ММА им. И.М. Сеченова

Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3

Приложения

375

Добавленная вода Желтый Голубой

Крышка

(большая чашка Петри)

Хроматографическая бумага

Маленькая чашка Петри

Пробка " с кнопкой

Восходящий фронт растворителя

Полоска

- хроматографической бумаги

Пятно

- разделяемой смеси веществ

- Растворитель

В

Фронт





растворителя




г©
Пятна стандартных веществ




ь
а


г©
•Г
а
с


\ У
Стартовая линия





Rf
_ а ~6




Двухмерная хроматограмма (первый пробег)

(второй пробег)

Сторона X

Сторона Y

Пятно смеси веществ A1B1C1 D1EmF.

Рис. П. 1.6. Методы хроматографии.

веществ. В этом случае для лучшего разрешения пятен должно быть проведено дополнительное разделение в перпендикулярном направлении с использованием второго растворителя (рис. П. 1.6, Г).

Для этого используют квадратный лист бумаги. Образец наносят на стартовую линию около одного из углов и проводят разделение в первом направлении. Бумагу вынимают из камеры, сушат, поворачивают на 90° и проводят повторное хроматографическое разделение, используя растворитель с иными свойствами. В результате вещества, частично разделенные после первого пробега, окончательно разделяются во втором растворителе. Бумагу вынимают, сушат и выявляют разделенные вещества соответствующим реактивом. Идентифицировать данное вещество можно, сравнив его местоположение с положением известных стандартных веществ. Такой метод использовал Кальвин в экспериментах по идентификации первичных продуктов фотосинтеза (разд. 7.6.3).

Прежде чем начать хроматографию веществ, которые вам необходимо идентифицировать, следует попрактиковаться в этом, используя цветные чернила или индика-

торы. Проведя опыты, которые описаны ниже, вы убедитесь, что чем концентрированнее стартовое пятно, тем лучше пойдет разделение. Вы убедитесь также в том, что разделение проходит лучше при более длинном хрома-то графическом пробеге.

Опыт П. 1.1. Разделение индикаторов

Материалы и оборудование

Хроматографическая бумага ватман № 1 или № 3 Метиловый оранжевый (защищенный) Бутылка с аммиаком 880 Чашка Петри Пипетка

Методика

Нанесите каплю защищенного метилового оранжевого в центр хроматографической бумаги. Высушите бумагу, помахав ею в воздухе, немного подержите ее над открытой бутылкой аммиака 880 и затем положите на чашку Петри (рис. П. 1.6, А). Капните одну каплю воды на пятно индикатора.

Наблюдаемый эффект

Два индикатора, содержащиеся в растворе метилового оранжевого, движутся центробежно с разными скоростями, причем синее кольцо движется быстрее желтого. Синее кольцо — это индикатор бромтимоловый синий, а желтое — метиловый оранжевый.

Опыт П.1.2. Разделение цветных чернил на составляющие компоненты

Материалы и оборудование

Лабораторная пробирка Пробка

Хроматографическая бумага Канцелярская кнопка Фломастеры Дистиллированная вода

Методика

1. Возьмите пробирку и пробку (см. рис. П. 1.6, Б) и прикрепите прямоугольник из хроматографической бумаги к пробке с помощью кнопки. Параллельно свободному концу хроматографической бумаги на расстоянии примерно 1 см от края проведите карандашом линию.

2. Разметьте стартовую линию крестиками через равные интервалы; на каждый цвет чернил должно приходиться по одному крестику.
Предыдущая << 1 .. 213 214 215 216 217 218 < 219 > 220 221 222 223 224 225 .. 280 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed