Биология в 3 томах. Tом 3 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003687-3
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 25.31. Врач отбирает пробу амниотической жидкости у беременной женщины. В другой руке врач держит ультразвуковой датчик, с помощью которого определяется положение плода и плаценты внутри матки. Изображение плода видно на экране дисплея на заднем плане фотографии.
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3
258 Глава 25
рая называется катетером; обезболивания при этом не требуется. К трубке или игле присоединен шприц, который нужен для того, чтобы мягко отсосать небольшие кусочки ткани. Процедуру в таких случаях проводят под ультразвуковым контролем.
Все клетки хориона, как и клетки эмбриона, произойти от зиготы, и, следовательно, генетически идентичны им. Поскольку клетки хориона на ранних стадиях развития активно делятся, их можно сразу использовать для хромосомного анализа (кариотипирования). При этом диагностируются болезни, связанные с хромосомными аномалиями, такие как синдромы Дауна, Клайнфельтера или Тернера. Можно также сделать вывод о поле ребенка, что чрезвычайно важно, если подозревается сцепленное с полом заболевание. Отобранные клетки можно культивировать в подходящей среде и использовать для анализа ДНК. Таким образом выявляют, например, муковисцидоз, хорею Гентингтона или талассемию.
Клетки растут быстро и результаты можно получить через 5—12 дней. Большое преимущество этого метода состоит в том, что его проводят на ранних стадиях беременности, между 8 и 12 нед. Однако риск повреждения плода при этом методе выше, чем при амниоцентезе. Подсчитано, что риск повреждения примерно на 2% выше, чем частота естественных нарушений. Если в результате тестирования принято решение удалить плод, аборт оказывается физически и эмоционально менее тяжелой и рискованной процедурой, чем более поздние аборты, которые проводятся после амниоцентеза.
Амниоцентез
Амниоцентез (взятие пробы амниотической жидкости для последующего анализа) — более старый и более доступный метод, нежели биопсия ворсинок хориона. Впервые он был использован в 1967 г. Обычно амниоцентез проводят на
1. Выделенная ДНК
4. Саузерн-блоттинг.
ДНК переносят на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр
5. Гибридизация с генным зондом
Радиоактивный зонд
Нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр
Полосы рестрикционных фрагментов
2. Разрезание рестриктазой
С помощью гель-электрофореза (см. рис. 25.4) ДНК разделяют на фракции согласно размерам ее фрагментов (полосы фракций на рисунке не показаны)
Груз Бумажные"" полотенца Нитроцеллюлозный или нейлоновыГ фильтр Агарозный гель,-содержащий ДНК Губчатая прокладка
Буфер"
6. Рентгеновская пленка после радиоавтографии
Запаянный пакет
Отмывка не связавшегося зонда и перенос фильтра на рентгеновскую пленку
Пленка засвечивается 7 в тех местах, где зонд прогибридизовался с ДНК
Рис. 25.32. Некоторые этапы анализа ДНК при генетическом скрининге. В процессе Саузерн-блоттинга денатурированная (одноцепочечная) ДНК переносится из агарозного геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр. В настоящее время бумажные полотенца обычно не употребляются; вместо этого используют метод электро-блоттинга или вакуумного блоттинга.
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3
15-16 неделе беременности, однако тест можно сделать раньше или позже — до 18 недели. Его нельзя проводить прежде, чем накопится достаточное для анализа количество амниотической жидкости или клеток. Метод более безопасен, чем биопсия ворсинок хориона, и лишь на 0,5% повышает риск самопроизвольного аборта (примерно 1 из 200). Пустотелую иглу вводят через брюшную стенку в полость матки под контролем ультразвукового сканнера при местном обезболивании (рис. 25.31). Из амниотического мешка отсасывают примерно 20 см3 амниотической жидкости. Его стенка обладает упругостью и отверстие от прокола закрывается само по себе. Жидкость в норме прозрачная и желтая, как моча. Ребенок постоянно заглатывает амниотиче-скую жидкость и она проходит через его кишечник. Поэтому в ней присутствуют живые клетки плода. Помимо этого амниотическая жидкость содержит клетки амниона, который, подобно хориону, происходит из зиготы и генетически идентичен плоду. Клетки осаждают в центрифуге и культивируют. При этом получают большое количество делящихся клеток, годных для хромосомного анализа и анализа ДНК. Процедура занимает 3—4 недели, что крайне неудобно в тех случаях, когда по результатам тестирования оказывается необходим аборт. Амниотическую жидкость исследуют и на наличие продуктов дефектных генов, например ос-фетопротеина, высокий уровень которого свидетельствует о повышенном риске определенных врожденных дефектов, например, расщелины нёба.
Диагностика перед имплантацией
Это одна из разновидностей пренатальной диагностики, которую проводят на эмбрионе перед его имплантацией в матку. Диагностика перед имплантацией — один из этапов программы экстракорпорального оплодотворения (разд. 21.7.4). После оплодотворения вне материнского организма приблизительно на 8-клеточной стадии из развивающегося эмбриона можно изъять одну клетку, не нарушая его способности к дальнейшему нормальному развитию. По результатам тестирования решают, можно ли данный эмбрион имплантировать в материнский организм. При этом исключается необходимость аборта. Однако этот дорогостоящий метод не всегда приносит успех и он вряд ли станет рутинной процедурой.
