Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тёрнер Э. -> "Биосенсоры: основы и приложения" -> 291

Биосенсоры: основы и приложения - Тёрнер Э.

Тёрнер Э., Карубе И., Уилсон Дж. Биосенсоры: основы и приложения — М.: Мир, 1992. — 614 c.
Скачать (прямая ссылка): biosensoriosnoviiprilojeniya1992.djvu
Предыдущая << 1 .. 285 286 287 288 289 290 < 291 > 292 293 294 295 296 297 .. 355 >> Следующая

samples. Anal. Biochem., 29, 238-47 (1969).
Глава 33
Спектроскопия внутреннего отражения в оптическом иммуноанализе
Рональд М. Сазерлэнд, Клаус Дене
33Л. Введение
Спектроскопия внутреннего отражения (СВО)- хорошо известный метод
изучения реакций в расположенном вблизи непрерывной поверхности слое
толщиной порядка длины волны света. В основе СВО лежит явление отражения
света на границе между двумя прозрачными средами с различными
показателями преломления. При полном внутреннем отражении светового пучка
в оптически более плотную среду в оптически менее плотной среде вблизи
отражающей поверхности генерируется электромагнитная волна. Эта волна
является частью отражаемого светового пучка и соответствует той небольшой
доле света, который проникает в среду с меньшим показателем преломления.
Эта затухающая электромагнитная волна и является тем самым
"чувствительным" элементом, который оптически взаимодействует с
соединениями, находя-
Образец
Детектор
а
Рис. 33.1. Схемы различных элементов внутреннего отражения, а: призма с
однократным отражением; 6: элемент с многократным внутренним отражением;
в: детектирование флуоресценции под прямым углом; г: детектирование
флуоресценции по ходу отраженного луча.
в
г
Спектроскопия внутреннего отражения
519
щимися вблизи или на исследуемой поверхности. За оптическим
взаимодействием в данной системе можно следить по изменению интенсивности
света, который выходит из оптически более плотной среды. Последнюю обычно
называют элементом внутреннего отражения (ЭВО). Конструктивно ЭВО могут
быть выполнены в виде элементов однократного и многократного отражения
(рис. 33.1, а и б соответственно). Элементы многократного отражения
называют также световодами и волноводами. СВО-сенсор позволяет непрерывно
контролировать реакции на границе раздела фаз при минимальных помехах от
соединений, находящихся вдали от волноводной поверхности (на расстоянии,
большем длины волны света).
Ранее применение СВО-устройств в биологии было связано главным образом с
исследованиями взаимодействия белков с различными поверхностями или на
поверхностях, которые подвергали предварительной обработке, чтобы сделать
их гидрофобными или гидрофильными. Для изучения таких взаимодействий
обычно использовали два оптических метода-нарушенное полное внутреннее
отражение (НПВО) и НПВО с флуоресценцией (НПВОФ). НПВО определяют как
"отражение в условиях, когда в процессе полного внутреннего отражения
действует какой-то сопряженный механизм поглощения света, вследствие чего
коэффициент отражения становится меньше единицы" [16]. Это означает, что
при наличии поглощающей свет пленки на волноводной границе раздела
энергию поглощенной пленкой затухающей волны можно оценивать по
ослаблению внутренне отраженного светового пучка. Спектроскопию НПВО
широко применяют для изучения взаимодействия белков на поверхностях [3,
4] в инфракрасной области спектра. Объединение НПВО и инфракрасной фурье-
спектроскопии позволяет быстро получать полные спектры белков,
адсорбированных на поверхности германиевого волновода [14, 15].
НПВО в сочетании с методами флуоресценции также используют для изучения
взаимодействия белков на поверхностях. НПВОФ можно рассматривать как
разновидность НПВО, поскольку первой стадией НПВОФ является поглощение
фотонов затухающей волны связанными с поверхностью молекулами и уже на
второй стадии происходит переизлучение света большей длины волны, т.е.
собственно флуоресценция. В работе [17] с помощью НПВОФ следили за
связыванием меченного дансил-хлоридом бычьего сывороточного альбумина
(БСА) с поверхностью кварцевого волновода. Этим же методом исследовали
связывание меченного флуоресцеином (FITC) бычьего у-глобулина [52] и
FITC-BCA [28, 29] с поверхностью силиконовой резины. Для изучения
связывания БСА с поверхностью кварцевого волновода в работах [50, 51]
использовали собственную флуоресценцию триптофановых остатков белка.
НПВОФ применяют в сочетании еще с двумя методами регистрации. Авторы [5]
использовали фотовысвечивание для изучения тетраметилродамин-БСА,
адсорбированного на кварцевой пластинке. Для исследования взаимодействия
меченных родамином IgG и инсулина с кварцевой пластинкой, покрытой БСА, в
работе [49] применен метод флуоресцентной корреляционной спектроскопии.
Потенциальные преимущества использования СВО-устройств в иммуноанализе
обусловлены главным образом тем, что они позволяют с высокой
чувствительностью контролировать поверхностные реакции. Обычные (см.
например [21]) методики иммуноанализа являются многостадийными, включают
несколько инкубаций и отделение связанных с антителами компонентов от
несвязанных перед измерением сигнала, характеризующего связывание антител
с антигенами. Стадия предварительного разделения является основным
источником погрешности анализа, громоздка и явно требует какого-то
технического решения. На создание методов иммуноанализа без разделения
(т. е. гомогенных методов) было нацелено довольно много исследований. В
Предыдущая << 1 .. 285 286 287 288 289 290 < 291 > 292 293 294 295 296 297 .. 355 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed