Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тёрнер Э. -> "Биосенсоры: основы и приложения" -> 152

Биосенсоры: основы и приложения - Тёрнер Э.

Тёрнер Э., Карубе И., Уилсон Дж. Биосенсоры: основы и приложения — М.: Мир, 1992. — 614 c.
Скачать (прямая ссылка): biosensoriosnoviiprilojeniya1992.djvu
Предыдущая << 1 .. 146 147 148 149 150 151 < 152 > 153 154 155 156 157 158 .. 355 >> Следующая

соиммобилизованными GOD и глюкоамилазой [51] или а-глюкозидазой [81]. В
обоих случаях мальтоза и олигосахариды, образующиеся при катализируемом
а-амилазой гидролизе крахмала, диффундируют в биферментную мембрану, где
под
Применение амперометрических биосенсоров в анализе
277
действием глюкоамилазы или а-глюкозидазы превращаются в глюкозу, которую
и определяют по реакции с GOD. Активность а-амилазы в сыворотке крови
человека можно определять глюкозоанализатором 23 А фирмы Yellow Springs
Instruments, поместив на его электрод мембрану с ферментной системой а-
глюкозидаза-GOD. Через 30 с после введения 25 мкл сыворотки в фосфатном
буферном растворе, содержащем 0,1% растворимого крахмала, в течение 30 с
регистрируют увеличение тока. Общая продолжительность анализа 100 с. При
анализе трех различных проб сыворотки (л = 20) в течение одного дня
погрешность составляет от 4,4 до 7,3%. Результаты повторных анализов
контрольных проб сыворотки в течение 17 дней варьировали в пределах 5%.
После 1000 анализов за этот же период сохранялось 70% от начальной
активности сенсора.
При помощи Glukometer GKM 01 с биферментным сенсором (глюкоамилаза и GOD)
измеряли активность а-амилазы бактериального происхождения.
Градуировочный график для этой системы линеен до 4,0 ед. активности а-
амилазы в рабочем растворе [54]. С помощью этого же биферментного сенсора
определяли активность пуллуланазы [53]. При фиксированном содержании
пуллулана (0,1%) в рабочем растворе максимальный наклон кривой ток-время
линейно зависит от активности пуллуланазы до 0,7 ед. активности/мл.
Предел обнаружения составляет 0,05 ед. активности/мл.
18.2.4.3. Аминотрансферазы. Определение активности аланин- и
аспартатамино-трансферазы (ALT, ЕС 2.6.1.2 и AST, ЕС 2.6.1,1; раньше их
обозначали как GPT и GOT) немногим менее важно, чем определение глюкозы.
Повышенная активность этих ферментов в сыворотке является признаком
миокардита и гепатита (желтухи). Все эти болезни становятся все более
распространенными в промышленно развитых странах. Нормальные значения
активности ALT и AST составляют 5-24 и 5-20 ед. активности
соответственно. Они могут увеличиваться в 100-1000 раз, особенно при
остром гепатите и алкоголизме. Поэтому для биосенсоров, предназначенных
для измерения активности этих ферментов, желателен широкий диапазон
определяемых содержаний.
Судя по реакциям, катализируемым ALT (уравнение 18.4) и AST (уравнение
(18.5):
L-Аланин и а-кетоглутарат -> L-глутамат + пируват (18.4)
L-Аспартат + а-кетоглутарат -> L-глутамат + оксальацетат, (18.5)
возможна регистрация с помощью биосенсоров продуктов этих реакций,
глутамата, пирувата и оксальацетата. Для последовательного определения
обеих аминотранс-фераз в работе [23] применили биферментный электрод,
включающий адсорбированную на поливинилхлориде оксальацетат
декарбоксилазу (ЕС 4.1.1.3) и пирува-токсидазу (ЕС 1.2.3.3). Базовым
датчиком служил электрод, чувствительный к пероксиду водорода. Сначала
определяют активность AST, добавляя пробу в рабочий раствор, содержащий
аспартат и а-кетоглутарат. Активность AST оценивают по наклону кривой ток
- время. Затем добавляют раствор субстрата, содержащий аланин, и
регистрируют дальнейшее увеличение наклона кривой. Разность этих двух
наклонов линейно связана с активностью ALT. Для обоих ферментов верхняя
граница диапазона определяемых содержаний доходит до 1500 ед.
активности/л. Продолжительность определения активности ферментов не
превышает 4 мин. Коэффициент корреляции результатов, полученных при
помощи сенсора и спектрофотометрическим методом, рассчитанный по данным
анализа 25 проб сыворотки, составляет 0,99 как для ALT, так и для AST.
Еще один столь же многообещающий подход связан с использованием L-глута-
матоксидазы. Этот недавно выделенный флавопротеин селективно катализирует
окислительное деаминирование аминокислоты с образованием NH3, а-
кетоглутарата и Н202. Сочетание иммобилизованной глутаматоксидазы с 02-
или Н20-датчиком дает глутаматный сенсор, который можно использовать для
определения ALT и AST
278
Глава 18
[79]. В этом методе, однако, требуется предварительно выдерживать пробу
30 мин со смесями соответствующих субстратов. Линейная зависимость между
током анодного окисления Н202 и активностью ALT и AST наблюдается до 200
ед. активности/л.
Для быстрого определения ALT можно использовать также описанный в разделе
18.2.1.10 сенсор на основе системы цитохром Z>2/LDH [66].
18.3. Заключение
Амперометрические биосенсоры для определения субстратов являются
надежными и высокоспецифичными приборами. Наивысший экономический эффект
достигается, если их использовать в автоматических проточных приборах,
например ADM 300 (ГДР), Enzymat (фирма Seres, Франция) или проточно-
инжекционном анализаторе, о выпуске которого объявила фирма Control
Equipment Со. (Принстон, США). В то время как для выпускаемых серийно
анализаторов наибольшая производительность составляет 120 проб в час,
Предыдущая << 1 .. 146 147 148 149 150 151 < 152 > 153 154 155 156 157 158 .. 355 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed