Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Тёрнер Э. -> "Биосенсоры: основы и приложения" -> 148

Биосенсоры: основы и приложения - Тёрнер Э.

Тёрнер Э., Карубе И., Уилсон Дж. Биосенсоры: основы и приложения — М.: Мир, 1992. — 614 c.
Скачать (прямая ссылка): biosensoriosnoviiprilojeniya1992.djvu
Предыдущая << 1 .. 142 143 144 145 146 147 < 148 > 149 150 151 152 153 154 .. 355 >> Следующая

выделенный недавно фермент L-глутаматоксидаза (ЕС 1.4.3.11) (см. также
раздел 18.2.4.2). Этим сенсором с хорошей точностью определяется глутамат
в соевом соусе (коэффициент корреляции с L-глутаматдекарбоксилазным
методом г - 0,978).
18.2.1.16. Изоцитрат. Это вещество является побочным продуктом
микробиологического производства лимонной кислоты. Высокая концентрация
изоцитрата в ферментационных бульонах может приводить к уменьшению выхода
кристаллической лимонной кислоты. Его содержание зависит как от штамма
микроорганизма, так и от условий проведения процесса. Поэтому
аналитический контроль изоцитрата в процессе производства может быть
весьма полезен.
Изоцитрат подвергается окислительному декарбоксилированию изоцитратдегид-
рогеназой (IDH, ЕС 1.1.1.42), которая представляет собой NADP + -
зависимый фермент (рис. 18.5). Авторы [44] иммобилизовали этот фермент на
поверхности электрода вместе с медиатором, однако результаты
амперометрического определения были неудовлетворительными. Более удачной
оказалась система, в которой расход кислорода при каталитическом
реокислении NADPH измеряли при помощи электрода Кларка. С этой целью IDH
иммобилизовали вместе с пероксидазой хрена (HRP, ЕС
1.11.1.17). Такой биферментный электрод использовали для определения
изоцитрата в его чистых растворах [65]. Использованию электрода в
ферментационных растворах препятствуют помехи со стороны других
компонентов пробы. Поэтому HRP заменяют феназинметосульфатом (PMS) в
растворимой форме [24] или иммобилизованным вместе с IDH (см. рис. 18.5).
Во всех случаях кофактор добавляют в фоновый раствор, и, таким образом,
он проникает в ферментный слой еще до введения изоцитрата.
18.2.1.17. Фосфат. Определение фосфата в крови и моче важно для
диагностики почечной недостаточности, нехватки витамина D,
гипервитаминоза, костных заболеваний, диабетического кетоацидоза и других
нарушений. Определение фосфора представляет интерес также для агрохимии и
защиты окружающей среды, поскольку он содержится в удобрениях и
детергентах.
Еще в 1975 г. в работе [16] было предложено в биосенсоре фосфат-иона
использовать комбинацию ингибируемого фосфатом фермента, щелочной
фосфатазы, и GOD. Аналогичный подход использовали при создании фосфатного
сенсора, который легко
Применение амперометрических биосепсоров в анализе
271
Пзоцитрат, ммоль/л
Рис. 18.5. Схема и градуировочные кривые для амперометрического
определения изоцитрата с изоцитратдегидрогеназным (IDH) мембранным
электродом. Рециклирование кофактора: растворимым PMS ( х );
соиммобилизованным PMS (А.); соиммобилизованной HRP (и растворимыми
сокатализаторалш) (•).
можно использовать в Glukometer [64]: срез ткани картофеля, содержащий
кислотную фосфатазу (ЕС 3.1.3.2), иммобилизовали на слое GOD, нанесенном
на кислородный электрод. Присутствующий в фоновом буферном растворе
глюкозо-6-фосфат гидролизуется кислотной фосфатазой, а на образующуюся
при этом глюкозу сенсор дает стабильный отклик. Добавление ингибитора
фосфатазы, неорганического фосфата, вызывает изменение сигнала,
соответствующее уменьшению высвобождения глюкозы. Этот гибридный сенсор
на основе растительной ткани позволяет определять концентрацию фосфата в
диапазоне от 1 до 30 ммоль/л при объеме пробы 100 мкл. Сенсор сохраняет
стабильность при проведении 300 анализов или в течение трех недель;
погрешность определения не превышает 2%; производительность анализа 15
проб. Из четырнадцати испытанных веществ мешают только тетраборат и
молибдат и в меньшей степени - борат и нитрат. Фосфат определяют с
хорошей точностью в моче и растворах удобрений. Однако для определения
фосфора в крови, в которой его нормальная концентрация составляет 0,5-1,8
ммоль/л, чувствительность сенсора недостаточна.
18.2.2. Низкомолекулярные поверхностно-активные вещества
Для органических веществ, молекулы которых имеют как гидрофобную, так и
гидрофильную часть, характерна тенденция к образованию мицелл. Это
особенно свойственно различным липидам и эфирам холестерина. Чтобы
предотвратить образование мицелл и получить молекулярно-дисперсные
растворы, в исследуемые биологические жидкости добавляют детергенты.
Последние, однако, изменяют растворимость кислорода, тем самым влияя на
результаты измерения потребления кисло-
272
Глава 18
рода. Детергенты могут также накапливаться на мембранах электрода, что
приводит к изменению скорости массопереноса.
Вместе с плазматическими фосфолипидами и триглицеридами холестерин
переносится в потоке крови, будучи связан со специфическими белками. Эти
липопротеины можно представить в виде сферических частиц с внешним
солюбилизирующим покрытием из белков и фосфолипидов, а внутри с
гидрофобной нейтральной сердцевиной из триглицерида и холестерина.
Нейтральные липиды (триглицериды), фосфолипиды и сложные эфиры
холестерина расщепляются специфическими гидролизами с образованием
субстрата соответствующей оксидазы. По рассмотренным выше причинам
Предыдущая << 1 .. 142 143 144 145 146 147 < 148 > 149 150 151 152 153 154 .. 355 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed