Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка):
С помощью того же варианта метода вычитающей гибридизации, который был использован выше для лимфом HIV-инфицированных пациентов, а также с помощью Норзен-блот гибридизации и дифференциального скрининга были проанализированы три лимфомы SIV-инфицированных обезьян (.Масоса mulatto). Две из них относились к типу DLBCL, а одна к лимфомам, подобным лимфоме Бёркитта (BLL). Результаты этих анализов приведены в табл. 7. Как и в случае HIV-1-ассоциированного лимфомогенеза у человека, в SIV-индуцированной лимфоме обезьяны происходило усиление транскрипции ряда генов, кодирующих белки окислительного фосфорилирования. Кроме этого, спектры высокоэкспрессирующихся генов в лимфомах
165
Таблица 7. Дифференциально экспрессирующиеся кДНК в лимфомах обезьян, выявленные с помощью вычруающей гибридизации (ВГ), дифференциального скрининга (ДС) и норзен-блот гибридизации (НБ)
Гены DLBCL (#1725) DLBCL (#1794) BLL (#1774)
1 ВГ ДС НБ ВГ дс НБ НБ
SAA + + -
AGP + + +
RPS3 + + + +
RPL8 + +
RPL41 + +
INF-ind + + +
Mtsl + + +
Р2MG + +
KIAA0129 + + + + + +
SET - + + -
TEF-1 +
ND-I + + + + + + +
ND-IV - + + + + +
COX-Il + + + +
CYTb - + +
I6S rRNA - + + +
ND-II - - - - -
Обозначения. SAA — сывороточный амилоид A,RPS - рибосомный белок, TEF-1 - фактор элон
гации трансляции 1, mts - метастазин, p2MG — бета2микроглобулин. + — повышенная транскрипция,
- — отсутствие изменения в уровне транскрипции.
человека и обезьян перекрываются и по некоторыми другими генам: онкоген set, интерферон-индуцируемый ген и неизвестный ранее ген, условно обозначенный как KIAA0129 (увеличение экспрессии этого гена в HIV-ассоциированных лимфомах человека обнаружили с помощью Норзен-гибриди-зации). Интересно, что в имеющейся литературе ни один из этих генов ранее не был ассоциирован с развитием лимфом.
Сравнение спектров генов, высокотранскрибирующихся в лимфомах человека и обезьян по сравнению с нормальными В-клетками и лимфоузлами, свидетельствует об их существенном перекрывании. Это указывает на определенное сходство механизмов лимфомогенеза у человека и макак, инфицированных вирусами иммунодефицита. Следовательно, Масаса mulatto, искусственно инфицированная SIV, может служить адекватной моделью при изучении процессов лимфомогенеза, ассоциированного у людей с HIV, что весьма важно для экспериментальных исследований.
Вместе с тем проведенный анализ экспрессии генов в SIV-ассоциированных лимфомах обезьян показал повышенную экспрессию таких, которые не были обнаружены при использовании вычитающей гибридизации на лимфомах человека. Например, среди высокоэкспрессирующихся генов в лимфомах обезьян имеется ген сывороточного амилоида А, который служит известным индикатором воспаления и повреждения тканей, но его повышенную экспрессию никто до сих пор не связывал с лимфомогенезом. В то же время с помощью вычитающей гибридизации ранее была показана повы-
166
шенная экспрессия данного гена в опухоли почки, наблюдали повышенную экспрессию гена амилоида А при остром лейкозе.
Обращает на себя внимание и повышенная экспрессия в лимфомах обезьян ряда генов рибосом-ных белков (RPS3, RPL8 и RPL41).
Ранее повышенную экспрессию этих генов обнаруживали в ряде злокачественных клеток, что зачастую связывали с увеличением синтеза рибосом. Однако в последние годы было установлено, что эти полипептиды не только входят в состав рибосом, но и влияют на различные процессы в клетке, в частности, на репарацию ДНК в ядре, а также на апоптоз. Следовательно, при рассмотрении результатов вычитающих гибридизаций следует иметь в виду, что некоторые рибосомные белки могут выполнять не только те функции, которые им стандартно приписывают, но и иные внерибосомные функции. В общем виде мы еще коснемся этого вопроса ниже.
Вирус-индуцируемый лимфомогенез может быть обусловлен действием на клетку не просто вируса как целого, а отдельных вирусных белков. В частности, выше уже говорилось о том, что продукт регуляторного гена tat вируса HIV-1 обладает онкогенным потенциалом. Для выяснения природы клеточных генов, на которые может действовать в клетке продукт гена tat HIV-1, нами была проведена вычитающая гибридизация с использованием РНК печени трансгенных мышей, содержащих ген tat HIV-1 под контролем металлотионеинового промотора (Тарантул и др., 1999). В результате нам удалось показать, что основным геном, характеризующимся повышенной экспрессией в печени таких мышей, является ген цитохрома Ь. В печени
3 различных трансгенных животных имела место также повышенная экспрессия и некоторых других генов окислительного фосфорилирования (табл. 8). Полученные данные указывают на то, что наличие в клетках продукта всего лишь одного вирусного гена может приводить к тем же изменениям в экспрессии генов морфологически нормальных клеток печени, как и те, которые имели место в опухолях, индуцированных целым вирусом HIV-1.
МИТОХОНДРИАЛЬНЫЕ ГЕНЫ И КАНЦЕРОГЕНЕЗ
В настоящее время становится очевидным, что злокачественная трансформация клеток определяется интегральным процессом, в который вовлечено множество различных генов (Свердлов, 2001). При правильном потоке многочисленных сигналов, приходящих к клеткам, они нормально растут и дифференцируются. При нарушении интеграции этих сигналов и происходит перерождение клеток. Раковое перерождение является многоэтапным
