Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка):
Таким образом, имеющиеся в настоящее время факты подчеркивают полифункциональность продукта гена tat и позволяют заключить, что эффекты этого гена могут существенно различаться в разных типах клеток.
Наши эксперименты с /аМрансфецированными Rat-2 клетками показали, что такие генетически модифицированные клетки способны образовывать мультислойные колонии (рис. 51). Однако морфология другого вида клеток - культуры клеток PC 12 - оставалась неизменной под действие гена tat. Не было обнаружено также влияния фактора роста нервов на нейрональную дифференцировку клеток PC 12, трансфецированных геном tat.
Трансфекция геном tat эмбриональных фибробластов мыши показала, что этот ген индуцирует у них формирование фокусов трансформации (табл. 1). Кроме того, котранфекция генами tat и c-Ha-ras 1 увеличивала эффективность образования фокусов. Это увеличение было статистически значимым как и при котранфекции этих клеток двумя хорошо известными онкогенами c-Ha-ras 1 и с-туе. Число мультислойных колоний заметно возрастало и после котранфекции клеток генами tat и с-тус. Полученные результаты подтверждают данные о наличии у гена tat онкогенного потенциала и свидетельствуют о наличии кооперации между продуктом гена tat IIIV-1 и классическими клеточными онкогенами c-Ha-ras 1 и с-тус.
На основании этих данных был сделан вывод, о том что по крайней мере некоторые эффекты гена tat на клетки являются клеточноспецифическими, на отдельные типы клеток он оказывает онкогенное действие.
На следующем этапе мы проводили котрансфекцию этих же трех линий клеток крысы плазмидами, содержащими ген nef ВИЧ-1, находящийся под
153
Рис. 51. Морфология нормальных (Д) и tof-трансфецированных (Б) клеток Rat-2. Увеличение х320
контролем промотра цитомегаловируса. В качестве отрицательного контроля использовали плазмиду с геном nef, содержащую мутацию, приводящую к сдвигу рамки трансляции. В результате было показано, что под действием гена nef происходит уменьшение скорости пролиферации клеток Rat-2 (рис. 52) и PC 12, что противоположно эффекту, оказываемому геном tat. Полученные нами результаты коррелируют с данными, свидетельствующи-
154
Таблица 1. Формирование фокусов трансформации в эмбриональных фибробластах крысы при трансфекции разными рекомбинантными плазмидами
Трансфецированная ДНК Число фокусов на 1,5 х 105 клеток Эффективность трансформации (xlO5)
_ 0 0
рМ'1'to/ 6,5±1,0 0,43
pMTtat + pEJ6.6 13,2+2,1 0,88
рМТtat + pSVc-/?;>c-l 9,(*1.9 0,60
pMTta/ + pNef 9,3±1,7 0,62
pNef 0 0
pSVc-wyc-1 0 0
pEJ6.6 0 0
pEJ6.6 + pS Vo/riyc-1 15.1+1,5 1,00
* Средние значения из 3 независимых экспериментов.
ми о том, что продукт гена nef способен уменьшать пролиферативный ответ на действие тромбоцитарного фактора роста (Graziani et al., 1996), снижает пролиферативную активность лимфоцитов за счет уменьшения количества рецепторов интерлейкина-2 на клеточной поверхности (Greenwey et al., 1995). Наряду с эти имеются данные, указывающие на способность экзогенного белка Nef стимулировать пролиферацию нормальных мононуклеарных клеток периферической крови человека (Quaranta et al., 1999).
Морфология эмбриональных фибробластов и клеток Rat-2 не менялась под действием гена nef. Однако трансфекция этим геном клеток РС12 приводила к образованию многоядерных синцитиев (рис. 53). Параллельно с этим уменьшался уровень пролиферации клеток. Таким образом, нами получено прямое указание на участие гена nef в механизме образования многоядерных синцитиальных клеток, возникновение которых наблюдается при инфицировании некоторыми изолятами HIV-1 Т-лимфоцитов и макрофагов человека. Вместе с тем подобный эффект не выявлен нами в nef-трансфе-цированных клетках Rat-2. Все это свидетельствует о том, что синцитийоб-разующее действие гена nef по-видимому, зависит от типа клеток, подвергающихся воздействию его продукта. В настоящее время в отношении регулирующего влияния гена nef на синцитийобразование имеются немногочисленные и противоречивые данные (Otake et al., 1994; Meylan et al., 1998). В частности, существуют указания на заметные отличия между генами «^/разных изолятов HTV-1 в осуществлении контроля формирования синцития в CD4+ Т-лимфоцитах (Meylan et al., 1998).
Эмбриональные фибробласты крысы, трансфецированные геном nef не образовывали фокусов трансформации. Вместе с тем был получен неожиданный эффект: при котрансфекции этих клеток генами tat и nef эффективность образования фокусов увеличивалась по сравнению с клетками, трансфецированными только геном tat (табл. 1). Кооперативный эффект генов tat и nef на неопластическую трансформацию клеток обнаружен нами впервые. В этом свете интересно, что недавно был описан кооперативный эффект между генами nef и Иск (Briggs et al., 2000). Это может означать, что ген nef способен усиливать онкогенную активность некоторых клеточных генов, имеющих онкогенный потенциал. Кроме того, недавно было также
155
" г V
Ч ' Л
А
*
53. Образование синцитий-подооных структур в /ге/-трансфицированной поликлональной культуре клеток РС12
