Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Свердлов Е.Д. -> "Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1" -> 49

Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.

Свердлов Е.Д. Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 — М.: Наука, 2003. — 372 c.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка): perspektivimoleculyargenetiki2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 199 >> Следующая

Предпринята попытка оценить влияние мутаций srm на точность митотической трансмиссии хромосом у эуплоидных клеток. Для этой цели использовали специальную генетическую систему (Parry, Zimmermann, 1976). Используя специально сконструированные л/та-мутантпыс и немутантные цис-гетерозиготы по маркерам хромосомы VII ade6l + cyh2/ + leul/+, следили за утратой гомолога, несущего нормальные аллели указанных генов. Как видно из табл. 2.5, у линий srm8isrm8, по сравнению с линиями SRM+, частота спонтанной утраты хромосомы VII повышена примерно на два порядка, а у линий srml2lsrml2 эта частота повышена в несколько раз. Приведенные данные подтверждают участие генов SRM8 и SRM12 в поддержании хромосом клетками дрожжей. Мутации srml, cdc28-srm, srml5 и srml7 не вызывают заметного увеличения частоты спонтанной утраты хромосомы VII эуп-лоидными клетками (табл. 2.5).
2.3.3. ГЕНЫ SRM И ПОДДЕРЖАНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ
НАСЛЕДСТВЕННЫХ СТРУКТУР КЛЕТКАМИ ДРОЖЖЕЙ
2.3.3.1. Влияние мутаций srm на митотическую стабильность
рекомбинантных плазмид
Мутация srml примерно вдвое снижает темп спонтанной потери дрожжевыми клетками кольцевых минихромосом, содержащих элемент ARS1 и последовательности CEN, тогда как мутация cdc28-srm повышает этот темп тоже примерно вдвое (Devin et al., 1990). Качественно сходное влияние оказывали упомянутые 2 мутации на поддержание клетками бесцентромерной
94
кольцевой плазмиды pTl (ARS1 TRPI) (Смирнова и др., 1995) По-видимому, апияние мутаций srml и cdc28-srm на поддержание кольцевых минихромосом может быть опосредовано не через цис-активные центромерные последовательности.
Мутации srml и cdc28-srm не оказывали влияния на митотическую стабильность плазмид YEpl3 и pYF91, несущих ori 2\хт ДНК. Очевидно, механизм, обеспечивающий относительно высокую митотическую стабильность плазмид с ori 2(j.ni ДНК и зависимый от функций, кодируемых этой эндогенной плазмидой (Broach, 1982), не зависит сколько-нибудь значительно от генов SRM1 и CDC28.
Наконец, мутации srml и cdc28-srm вызывали заметное повышение исходно весьма низкой митотической стабильности бесцентромерных плазмид с различными хромосомными элементами ARS. По-видимому, соответствующие два гена принимают участие в механизмах, определяющих эффективность репликации кольцевых рекомбинантных плазмид и/или асимметрическую передачу бесцентромерных плазмид при делении клеток (Murray, Szostak, 1983а).
Было также изучено влияние других мутаций srm на митотическую стабильность кольцевой минихромосомы YCp50 (CEN4 ARS1) и бесцентромер-ной кольцевой плазмиды YRp 12 (ARS1). Указанными плазмидами трансформировали клетки специально сконструированных близкородственных ято-мутантных и немутантных урацилзависимых (игаЗ) гаплоидных штаммов-реципиентов (Колтовая и др., 2001).
Как видно из табл. 2.6А, для каждой из четырех групп л/то-мутантных трансформантов, имеющих нормальный митохондриальный геном (/7го+), по сравнению с группой трансформантов SRM+ rho+, митотическая стабильность кольцевой минихромосомы YCp50 оказывается сниженной. Снижение митотической стабильности бесцентромерной плазмиды YRp 12 обнаруживается у мутантов srml2, srml5, srml 7. Очевидно, гены SRM8, SRM 12, SRM15 и SRM 17, подобно генам SRM1 и CDC28, участвуют в поддержании дрожжевыми клетками кольцевых рекомбинантных плазмид, содержащих хромосомный элемент ARS.
2.3.3.2. Повреждения митохондриального генома клеток srm
способны модифицировать митотическую стабильность плазмид
Имеются немногочисленные литературные данные, показывающие, что поддержание рекомбинантных плазмид в дрожжевой клетке зависит от функционирования ее митохондриального генома. Митотическая стабильность плазмиды Rcp-CEN3 (ARS рДНК, CEN3) оказалась заметно выше у мутантов rho~, полученных после обработки бромистым этидием, чем у дыхательно-компетентных клеток исходного штамма (Ларионов и др. 1983).
В другой работе (Irie et al., 1991) обнаружено еще более сильное стабилизирующее влияние rho0- и rho--мутаций на поддержание в клетках S. cerevisiae плазмиды, выделенной из клеток Zygosaccharomyces rouxii и содержащей две ARS-последовательности. Эта стабилизация плазмид не связана непосредственно с нарушением дыхания, поскольку она не наблюдается у ядерных /^'/-мутантов, которые имеют дыхательно-недостаточный фенотип, но сохраняют интактный митохондриальный геном. Продемонстриро-
95
Таблица 2.6. Митотическая стабильность плазмид YCpSO (А) и YRpl2 (В) у гаплоидных штаммов различных генотипов при размножении клеток в иеселективиых (А) и селективных (Б) условиях
А
Генотип клонов Количество изученных клонов Просмотрено колоний Доля колоний, сохранивших плазмиду, %
SRM+ rho+ 5 [641 41,6±11,6
rho~ 7 2965 42,3±3,8
rho0 13 4407 38,9±5,4
srm8 rho+ 4 1240 23,1+5,4
rho~ 5 [673 41,3±10,2
srml2 rho+ 8 3153 18,0±3,1
rho~ 8 396 13,1±3,0
srml5 rho+ 6 1850 18,1±5,1
rhu 5 1010 20,6±7,0
srml7 rho+ 8 1944 28,7±2,0
Б
Генотип клонов Количество изученных клонов Просмотрено колоний Доля колоний, сохранивших плазмиду, %
SRM+ rho* 8 3383 34,3+2,6
rho 5 2667 38,9+2,4
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 199 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed